维生素D受体调控TRPV5表达抑制肾癌细胞的增殖和转移
发布时间：2020-11-08 13:04
目的:肾细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,尽管肾癌治疗取得了重大进展,但预后仍然较差,死亡率仍然很高。因此,迫切需要研究肾癌细胞增殖和转移的分子机制,为肾癌的治疗提供新的方法。课题组前期研究表明与正常肾组织相比较,VDR表达在肾癌中明显降低,进一步分析还发现TPRV5和VDR的表达水平相关,提示TRPV5可能受VDR的调控参与肾细胞癌的发生和发展,然而,VDR是否调控TRPV5表达,及其在肾癌生物学行为中的作及调控机制并不明确,本研究的目的为揭示VDR是否可调控TRPV5转录表达从而影响肾细胞癌增殖和转移。方法:western blot和RT-PCR检测正常肾细胞癌细胞株caki-1和786-O细胞中VDR蛋白的表达情况;用慢病毒构建VDR过表达和敲除的caki-1和786-O细胞模型,分别用RT-PCR和western blot检测过表达和敲除VDR基因的caki-1和786-O细胞的VDR的mRNA和蛋白水平变化;分别用MTT法、流式细胞术、Transwell小室实验检测过表达和敲除VDR后,caki-1和786-O细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭情况;转录组测序方法检测过表达和敲除VDR后caki-1细胞的差异表达基因功能富集/信号通路分析情况;用RT-PCR和western blot检测过表达和敲除VDR基因的caki-1细胞的TRPV5的mRNA和蛋白水平变化;用MTT法、Transwell小室实验检测单纯敲除VDR、同时敲除VDR和TRPV5、阴性对照组三组caki-1细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果:VDR在caki-1细胞中的表达量要高于786-O细胞。体外细胞功能实验表过表达VDR能够显著抑制caki-1和786-O细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡;相反的,敲除VDR能促进以上两种细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡。转录组测序也表明过表达和敲除VDR的caki-1细胞显著差异表达基因富集在细胞凋亡、增殖、分化和迁移等功能上,另外,差异表达基因显著的富集在TGF-β、Apoptosis、TNF、Wnt等信号通路上。此外,我们发现TRPV5和VDR表达呈负相关,即VDR敲除能够促进TRPV5的表达,VDR过表达则抑制TRPV5的表达。最后,单独敲除VDR、同时敲除VDR和TRPV5、阴性对照组三组caki-1细胞实验表明敲除VDR可以诱导细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,但在caki-1细胞敲除VDR的基础上,继续敲除TRPV5后,细胞增殖、迁移和侵袭的能力又被削弱,换言之,敲除TRPV5可以抑制caki-1细胞被VDR敲除所诱导的增殖、迁移和侵袭的能力。结论:VDR在肾细胞癌细胞株中起着一个肿瘤抑制因子的作用,此外,VDR可以通过调控TRPV5的转录表达来抑制肾癌细胞株的增殖和转移。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.11
【部分图文】：
3.1 VDR 在不同组别肾细胞癌细胞株内的表达情况如图 1.1（A）所示，WB 和 RT-PCR 结果显示 VDR 在 RCC 细胞株 caki-1 和 786-O细胞中均表达，且 VDR 在 caki-1 细胞中的表达量要高于 786-O 细胞。如图 1.1（B）和（C）所示，WB 和 RT-PCR 结果显示在 RCC 细胞株 caki-1 和786-O 细胞中，LeVDR 组（VDR 过表达组）较 LeCtrl 组（过表达阴性对照组）VDR的表达量明显升高；而 shVDR 组（VDR 敲除组）较 shCtrl（敲除阴性对照组）VDR的表达量明显较少，且有统计学意义。结果证实慢病毒介导的 VDR 过表达和敲除有效，成功的构建了 VDR 过表达和敲除的 RCC 细胞株。3 实验结果
图 1.2 VDR 抑制 RCC 细胞增殖3.3 过表达 VDR 抑制 786-O 细胞迁移；敲除 VDR 促进 786-O 细胞迁移。Transwell 小室迁移实验用来检测细胞迁移能力，实验结果显示，VDR 过表达组的 786-O 细胞迁移能力较对照组明显减弱（p<0.01），与之相反，VDR 敲除组的786-O 细胞迁移能力较对照组有所增强（p<0.05）。可以得出结论，VDR 可以抑制786-O 细胞的迁移能力（见图 1.3）。
图 1.3 VDR 抑制 786-O 细胞迁移能力。左图为细胞在 100x 光镜下图形；右图为200x 光镜下 5 个视野所得统计图形3.4 过表达 VDR 抑制 786-O 细胞侵袭；敲除 VDR 促进 786-O 细胞侵袭Transwell 小室侵袭实验用来检测细胞侵袭能力，实验结果显示，VDR 过表达组的 786-O 细胞侵袭能力较对照组明显减弱（p<0.01），与之相反，VDR 敲除组的786-O 细胞侵袭能力较对照组有所增强（p<0.05）。可以得出结论，VDR 可以抑制786-O 细胞的侵袭能力（见图 1.4）。
【参考文献】
本文编号：2874827
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.11
【部分图文】：
3.1 VDR 在不同组别肾细胞癌细胞株内的表达情况如图 1.1（A）所示，WB 和 RT-PCR 结果显示 VDR 在 RCC 细胞株 caki-1 和 786-O细胞中均表达，且 VDR 在 caki-1 细胞中的表达量要高于 786-O 细胞。如图 1.1（B）和（C）所示，WB 和 RT-PCR 结果显示在 RCC 细胞株 caki-1 和786-O 细胞中，LeVDR 组（VDR 过表达组）较 LeCtrl 组（过表达阴性对照组）VDR的表达量明显升高；而 shVDR 组（VDR 敲除组）较 shCtrl（敲除阴性对照组）VDR的表达量明显较少，且有统计学意义。结果证实慢病毒介导的 VDR 过表达和敲除有效，成功的构建了 VDR 过表达和敲除的 RCC 细胞株。3 实验结果
图 1.2 VDR 抑制 RCC 细胞增殖3.3 过表达 VDR 抑制 786-O 细胞迁移；敲除 VDR 促进 786-O 细胞迁移。Transwell 小室迁移实验用来检测细胞迁移能力，实验结果显示，VDR 过表达组的 786-O 细胞迁移能力较对照组明显减弱（p<0.01），与之相反，VDR 敲除组的786-O 细胞迁移能力较对照组有所增强（p<0.05）。可以得出结论，VDR 可以抑制786-O 细胞的迁移能力（见图 1.3）。
图 1.3 VDR 抑制 786-O 细胞迁移能力。左图为细胞在 100x 光镜下图形；右图为200x 光镜下 5 个视野所得统计图形3.4 过表达 VDR 抑制 786-O 细胞侵袭；敲除 VDR 促进 786-O 细胞侵袭Transwell 小室侵袭实验用来检测细胞侵袭能力，实验结果显示，VDR 过表达组的 786-O 细胞侵袭能力较对照组明显减弱（p<0.01），与之相反，VDR 敲除组的786-O 细胞侵袭能力较对照组有所增强（p<0.05）。可以得出结论，VDR 可以抑制786-O 细胞的侵袭能力（见图 1.4）。
【参考文献】
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1 陈文浩;杨明;张艳桥;;维生素D及其受体在胰腺癌中的研究进展[J];中国肿瘤;2015年04期
2 郑敏;刘强;;维生素D及维生素D受体的研究进展[J];医学综述;2013年21期
3 那键;马超;霍维玲;秦瑞云;吴晓东;许永;王涛;谷贵山;;新型Ca~(2+)通道TRPV5和TRPV6的研究进展[J];吉林大学学报(医学版);2013年03期
本文编号：2874827
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