EGFR突变体在肺癌中的降解调控与靶向耐药机制研究

发布时间：2020-11-13 02:23

　　 肺癌是全世界癌症相关死亡最主要的原因,EGFR(The epidermal growth factor receptor,表皮生长因子受体)属于RTK(receptor tyrosine kinases,受体酪氨酸激酶)Erb B家族,与肺癌的发生发展密切相关。测序分析显示EGFR在NSCLC(Non-small cell lung cancer,非小细胞肺癌)中存在高的突变频率,而突变的EGFR具有持续性激活的激酶活性从而导致肿瘤的生长。虽然对野生型EGFR的内吞降解机制研究的比较清楚,但对突变体EGFR的内吞降解仍有争议。19号外显子缺失突变的EGFR因其在在NSCLC高的突变频率而被广泛研究,我们发现在NSCLC细胞中,19号外显子缺失突变的EGFR通过不依赖于Dynamin(发动蛋白)的活性进行持续性的内吞作用经溶酶体降解。EGF刺激和抑制HSP90的活性能够进一步加快19号外显子缺失突变EGFR的降解,但分别以Dynamin活性依赖和非依赖的形式进行。虽然19号外显子缺失突变EGFR以不同的方式进行内吞,但都是通过泛素化介导的内体-溶酶体途径进行降解,而且这种降解必须依赖其激酶活性。酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼能够有效治疗19号外显子缺失突变EGFR的NSCLC患者,但大多数患者在接受治疗后会出现药物耐受,而EGFR的二次突变及c-MET的扩增是获得性耐药最主要的原因,仍有大约30%吉非替尼获得性耐药的机制并不明确。因此,对新型吉非替尼耐药机制的研究显得十分重要。在本研究中,以对吉非替尼敏感的细胞系HCC827为亲本,建立筛选新型的吉非替尼耐药细胞RE-1和RE-2,并对其耐药机制进行研究,发现HCC827对吉非替尼的耐受是通过多方面的改变引起的,涉及到FGFFGFR信号通路和NF-κB信号通路的活化、EMT(epithelial–mesenchymal transition,表皮-间质转化)、细胞干性的增强、ROS(reactive oxygen species,活性氧)的显著下调等。去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)在参与调节许多细胞进程中扮演着重要的作用。泛素化(ubiquitylation)和去泛素化(deubiquitylation)作为一个动态平衡的过程参与各种重要的生命活动。UCHL1(Ubiquitin C-terminal hydrolase L1,泛素羧基末端水解酶L1)在吉非替尼耐药细胞中的高表达,可能预示着其可以作为一个新的肿瘤细胞耐药标志物或治疗靶标。同时,吉非替尼耐药细胞对传统化疗药物顺铂更为敏感,这也为获得性耐药患者的治疗提供了新的思路。因此我们关于19号外显子缺失突变EGFR的内吞降解调控及吉非替尼耐药机制研究可能对NSCLC患者的临床治疗提供新的理论依据和治疗策略。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R734.2
【部分图文】：

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图 2：19 号外显子缺失突变 EGFR 的持续性内吞降解A.细胞经血清饥饿处理 6 h，再加 20 或 100 ng/mL EGF 处理不同时间收集蛋白样品检测 EGFR表达水平，β-Actin为内参蛋白，误差线代表平均值±标准误（n=3）。B.免疫荧光实验显示HCC827和 H1650 在加入 EGF 处理 4 小时后 EGFR 在细胞中的定位。C 和 D.A549、H1650 和 HCC827

大连医科大学硕士学位论文外显子缺失突变 EGFR 通过内体-溶酶体途径进的研究表明，EGFR 通过溶酶体进行持续性的降解。而突变体 E途径通过溶酶体降解有待进一步研究，所以，我们通过激光共聚变体 EGFR 是否与早期内体标志物 EEA1 和晚期内体/溶酶体标 存在共定位。如图 3，突变体 EGFR 确实与 EEA1 和 LAMP2 存在说明 19 号外显子缺失突变的 EGFR 同野生型 EGFR 一样，都是-溶酶体途径进行降解。
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 Byung Min Chung;Eric Tom;Neha Zutshi;Timothy Alan Bielecki;Vimla Band;Hamid Band;;Nexus of signaling and endocytosis in oncogenesis driven by non-small cell lung cancer-associated epidermal growth factor receptor mutants[J];World Journal of Clinical Oncology;2014年05期

本文编号：2881587