uPAR在肿瘤多药耐药中的作用与机制研究

发布时间：2020-11-14 00:08

　　 目的:肿瘤是人类面临的巨大疾病问题,化疗作为目前肿瘤的一种有效治疗方式,应用非常广泛。但是肿瘤细胞很容易对化疗药物产生抗药性,特别是肿瘤多药耐药的发生,很容易导致化疗方案的失败。uPAR对肿瘤的发生发展起着重要作用,但是关于uPAR与肿瘤多药耐药方面的研究报道很少。所以,本论文想研究uPAR在肿瘤多药耐药中所起的作用与机制。方法:1.利用R语言编程技术分析TCGA数据库中与uPAR有关的RNA表达水平数据和临床预后数据。2.利用CRISPR-Cas9基因敲除技术在HCT8/T和KB_(V200)当中敲除uPAR,利用Gateway克隆技术构建过表达uPAR的重组载体,在AGS和H1299中过表达uPAR。3.利用划痕、Transwell、Softagar、MTT、鬼笔环肽和DAPI双染色等方法,检测改变uPAR后对于肿瘤细胞多药耐药能力和增殖生长、迁移、侵袭等能力的影响情况。4.利用Western Blot来探究uPAR蛋白在肿瘤多药耐药中的作用机制。结果:1.TCGA数据显示uPAR在常见的肿瘤组织中高表达,且在肺腺癌和肾透明细胞癌患者中uPAR的高表达与临床预后不良有关。2.在肿瘤多药耐药细胞株HCT8/T和KB_(V200)中敲除uPAR后,肿瘤细胞的多药耐药能力减弱。而在低表达uPAR的肿瘤细胞AGS和H1299中过表达uPAR后,肿瘤细胞的多药耐药能力增强。3.在肿瘤多药耐药细胞株HCT8/T和KB_(V200)中敲除uPAR后,肿瘤的增殖生长、迁移、侵袭能力减弱。而在低表达uPAR的肿瘤细胞AGS和H1299中过表达uPAR后,肿瘤的增殖生长、迁移、侵袭能力增强。4.在HCT8/T、KB_(V200)中敲除uPAR后:EGFR、HER3、β-Catenin、p-ERK1/2(Thr202/Tyr204)、p-JNK(Thr183/Tyr185)、p-PTEN(Ser380)、BCL-XL、Snail的表达下降,相反在AGS、H1299中过表达uPAR后这些蛋白的表达却上升。结论:uPAR蛋白在常见的肿瘤组织中高表达,且在肺腺癌和肾透明细胞癌患者中uPAR的高表达与临床预后不良有关。uPAR能促进肿瘤多药耐药的发生和肿瘤的增殖生长、迁移、侵袭。另外,uPAR可能通过直接或者间接的影响表皮生长因子受体(EGFR)家族表达水平;Wnt/β-Catenin、MAPK信号通路;PTEN抑癌蛋白的磷酸化水平;抗凋亡信号通路;上皮-间质转化(EMT)途径等来促进肿瘤多药耐药的发生和肿瘤的增殖生长、迁移、侵袭。
【学位单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R73-3
【部分图文】：

锚定附着所需的序列由外显子 7 编码。成熟的 uPAR 蛋白由 313 个氨基酸残基组成，相对分子质量 55KD—60KD，等电点为 4.5 左右[45]。只存在胞外结构域，没有跨膜区和胞内结构，是通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚连接到细胞质膜上，所以 uPAR 也是一种常见的糖蛋白，去掉糖基后其分子量大约为 35KD[46]。GPI 锚的形成是通过在内质网中不断的组合切割附着而来，形成后替代 uPAR 蛋白的 COOH-末端部分，逐步使 uPAR 蛋白质成熟。并且糖脂连接所需的两个关键序列元件是 ser282-gly-283-ala284 和第306-313 位置的氨基酸序列[47]。uPAR 的氨基酸序列具有三个重复，每个重复约90 个氨基酸序列长度，表明存在三个同源独立折叠的结构域[48]。确实经研究发现 uPAR 含有由短连接子区连接的三个 Lu 结构域，这些结构域与淋巴细胞抗原6（Ly-6）蛋白超家族结构域同源，被称为 D1-D3 的 N-末端，也称为三指折叠域（图 1a）。通常 Lu 结构域中富含半胱氨酸，导致 Lu 结构域常由 4-5 个二硫键连接形成 5-6 个反平行 β-链折叠球状结构（图 1b）[49, 50]。

34图 3. uPAR 敲除肿瘤细胞株的构建与鉴定Figure 3. The construction and identification of uPAR knockout tumor cell linesA：MTT 检测到 HCT8/T 和 KBV200的嘌呤霉素（Puromycin）最小致死浓度分别为 100μg/ml 和 10μg/ml。B：WesternBlot 检测构建好的 HCT8/T 和 KBV200uPAR基因敲除株中 uPAR 的表达水平。C：设计好的鉴定 HCT8/T 和 KBV200uPAR 基

42图 7. uPAR 能促进肿瘤的增殖生长Figure 7.uPAR can promote tumor proliferationA：MTT 法检测到在 HCT8/T 和 KBV200中敲除 uPAR 后，增殖生长减弱，相反在AGS、H1299 中过表达 uPAR 后，增殖生长增强。B、C、D、E：SoftAgar 软琼脂 3D 培养法检测到在 HCT8/T 和 KBV200中敲除 uPAR 后，增殖生长减弱，相反在 AGS、H1299 中过表达 uPAR 后，增殖生长增强。（**代表 P<0.01，表示有统计学差异）3.6 uPAR 能促进肿瘤的迁移为了探究 uPAR 是否能对肿瘤的迁移产生影响，我们分别在 HCT8/T、KBV200中敲除 uPAR 和在 AGS、H1299 中过表达 uPAR,然后采用划痕法检测改变 uPAR后对于肿瘤细胞迁移的影响情况。结果显示，在 HCT8/T 和 KBV200中敲除 uPAR
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 吴礼高;朱清;于东红;承泽农;;乳腺浸润性微乳头状癌组织中MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表达和意义[J];淮海医药;2014年01期

2 肖军;吴真;黄剑飞;周维镕;;下咽癌组织中uPAR的表达及临床意义[J];江苏医药;2009年12期

3 高利民,毛伯镛,张尚福;髓母细胞瘤中尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)表达[J];四川医学;2005年06期

4 高利民;毛伯镛;张尚福;;髓母细胞瘤中尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)表达[J];四川医学;2005年12期

5 薛会朝,李守淼;结肠癌中uPAR的表达[J];河南外科学杂志;2004年01期

6 孙梦梅;靳彦文;李平;曹诚;张部昌;;新型抗uPAR人源化抗体的表达和活性检测[J];军事医学;2011年04期

7 许丰;刘义文;;uPAR及PTEN在肝癌组织中的表达及其意义[J];海南医学院学报;2010年08期

8 李亚妤;宋李桃;杜园园;汤绚丽;杨梦蝶;;雷公藤甲素对5/6肾切除大鼠uPAR和β3整合素表达的影响[J];中华中医药杂志;2017年10期

9 张启良,陈岚,刘玮,张健,杨君蕊,张建平;放射配基结合分析法对不同细胞uPAR表达的比较研究[J];上海第二医科大学学报;2000年02期

10 刘岩;潘云峰;方霖楷;郭欣;吴云婷;;uPAR在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的功能及机制[J];中山大学学报(医学科学版);2014年02期

相关博士学位论文 前10条

1 李春阳;尿激酶型纤溶酶原激活剂受体在人肺巨细胞癌高低转移细胞株中表达调控的研究[D];复旦大学;2004年

2 吕正华;uPA及uPAR在下咽癌中的表达及喉气管瓣在晚期下咽癌修复中的应用研究[D];山东大学;2005年

3 高强国;uPA/uPAR在皮肤上皮化/再上皮化过程中表达及作用的初步研究[D];第三军医大学;2005年

4 陈未;尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）的致动脉粥样硬化作用和机制研究[D];中国协和医科大学;2006年

5 付东亮;尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）与易损斑块的关系研究[D];北京协和医学院;2010年

6 刘双海;uPAR在肝癌中的表达及其与肝癌侵袭转移关系研究[D];苏州大学;2008年

7 金伟权;尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）与动脉粥样硬化之间的相关性研究[D];北京协和医学院;2009年

8 马建超;1,25(OH)2D3抑制足细胞uPAR表达和降蛋白尿研究[D];南方医科大学;2014年

9 张岩;uPAR促进单核细胞分化及摄取ox-LDL的作用和机制研究[D];北京协和医学院;2015年

10 操胜;针对HER2和uPAR基因靶向治疗乳腺癌的研究[D];西北农林科技大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 段云娇;uPA与uPAR对体外培养牛卵母细胞核成熟的影响[D];内蒙古农业大学;2018年

2 王昆;uPAR在肿瘤多药耐药中的作用与机制研究[D];暨南大学;2018年

3 刘炯明;组织芯片检测LIMK1、uPA、uPAR在人胃腺癌中表达的临床病理意义[D];南华大学;2018年

4 刘新宇;uPA与uPAR调节体外培养牛卵丘颗粒细胞增殖的机制研究[D];内蒙古农业大学;2018年

5 赵宇环;DDX3、uPAR在结直肠癌及其肝转移中的表达及相关性分析[D];川北医学院;2017年

6 李娟;VEGF-C、uPAR在宫颈鳞癌侵袭转移及预后中的研究[D];河北医科大学;2010年

7 郝俊杰;uPAR在维持人精子正常功能方面的体外实验研究[D];山西医科大学;2009年

8 杨晶;二烯丙基二硫下调uPAR抑制人结肠癌细胞增殖、迁移与侵袭[D];南华大学;2011年

9 黄翠萍;uPA、uPAR及PAI-1在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义[D];青岛大学;2010年

10 潘其壮;血清uPA及uPAR含量与前列腺癌及其骨转移的相关性研究[D];桂林医学院;2011年

本文编号：2882819