芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床观察及对白血病细胞株NB4端粒相关蛋白的影响

发布时间：2020-11-22 06:51

　　 目的:本研究旨在观察芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床症状改善情况,评价芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床有效性和安全性,同时并探讨芪莲益髓清毒颗粒对急性白血病NB4细胞端粒相关蛋白的影响及作用机制,为其更好的用于白血病的治疗寻求实验学支持,以期为提高白血病的临床疗效提供新的思路和方法。方法:1.临床试验:选择2015年9月—2017年12月就诊于山东省中医院血液科的急性白血病初治患者30例,年龄在15-75岁之间,随机分为中药组和对照组,每组15例,中药组给予常规化疗方案加芪莲益髓清毒颗粒,每次3袋,每日三次辅助治疗;对照组给予常规化疗方案。两个疗程后,分析两组患者中医症候积分、疗效与临床血象。2.体外实验:(1)培养急性白血病NB4细胞株。(2)CCK-8法检测不同浓度、不同时间点芪莲益髓清毒颗粒对NB4细胞体外生长的抑制作用,由此确定芪莲益髓清毒颗粒的I50值。(3)Western-blot检测用药组RAP1、TRF1、TRF2、TZAP的蛋白表达水平。(4)实时定量PCR(RT-PCR)检测用药组RAP1、TRF1、TRF2、TZAP m RNA的表达水平。结果:1.临床试验:中医症候总积分比较:两周期化疗后,采用芪莲益髓清毒颗粒联合化疗的中药组的中医症候总积分明显低于采用单纯化疗的对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。血象比较:治疗前后两组白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等血象变化显示,中药组的血象恢复程度明显优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。中医症候疗效比较:中药组的中医症候疗效明显优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。2.体外实验:(1)CCK-8法示芪莲益髓清毒颗粒对NB4细胞体外生长具有抑制作用,并且结果呈浓度、时间相关性。芪莲益髓清毒颗粒作用于NB4细胞48h的IC50为62mg/m L。因此我们选取中剂量浓度进行实验,芪莲益髓清毒颗粒浓度为60mg/m L(低于IC50值)。(2)Western-blot法检测TZAP、TRF1、TRF2、RAP1蛋白的表达,结果表明,中药组与对照组比较可出现NB4细胞中TRF1蛋白表达增加;TRF2、RAP1、TZAP蛋白表达减少,有显著性差异(P0.01)。Spearman相关系数进行相关性分析,结果显示:TRF2蛋白表达与TRF1、TZAP蛋白表达呈显著负相关(r1=-0.863、r2=-0.843);TRF1蛋白表达与TZAP表达呈显著正相关(r=0.922)。(3)RT-PCR检测基因表达结果与Western-blot蛋白表达结果改变基本相同,提示芪莲益髓清毒颗粒可能通过基因转录水平影响蛋白表达。结论:我们选取的芪莲益髓清毒颗粒对化疗具有增效减毒的作用,在临床辅助治疗急性白血病方面具有一定的有效性与安全性。在体外实验研究中芪莲益髓清毒颗粒表现出一定程度的抗癌活性,其作用机制可能与上调TRF1、TZAP、RAP1蛋白表达水平;下调TRF2蛋白表达水平,以诱导白血病细胞凋亡加速有关,为芪莲益髓清毒颗粒在临床上的应用提供实验理论依据。
【学位单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R733.71
【文章目录】：
提要
Abstract
引言
第一部分 芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床观察
    1.临床资料
        1.1 病例来源
        1.2 病例分组
    2.试验标准
        2.1 纳入标准
        2.2 排除标准
        2.3 脱落与剔除标准
    3.研究方法
        3.1 治疗方法
        3.2 支持治疗
    4.观察指标
        4.1 安全性观测
        4.2 疗效性观测
    5.疗效判定
        5.1 中医证候分级：（见表 1）
        5.2 疗效评定标准
    6.统计方法
    结果
        1.病例入组情况
        2.两组间基数比较
            2.1 两组患者急性白血病各分型所占比例比较
            2.2 两组患者治疗前一般情况比较
            2.3 两组患者治疗前血象比较
        3.治疗结果分析
            3.1 两组治疗前后中医证候积分比较
            3.2 两组中医症候疗效比较
            3.3 两组治疗前后外周血象比较
第二部分 芪莲益髓清毒颗粒对急性白血病NB4细胞株端粒相关蛋白的影响及作用机制
    1.实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验设备
        1.3 实验药品芪莲益髓清毒颗粒储存液配制
        1.4 细胞培养试剂
        1.5 细胞清洗液
        1.6 细胞活性检测试剂
        1.7 WesternBlot试剂
        1.8 RT-PCR试剂
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 CCK-8 法检测细胞活性
        2.3 Western-blotting检测RAP1、TRF1、TRF2、P16、TERT蛋白的表达
        2.4 统计学方法
        2.5 RT-PCR检测RAP1、TRF1、TRF2、TZAP的 mRNA的表达
    3.分析方法
    4.实验结果
        4.1 CCK-8 法检测细胞活性
        4.2 Western-blotting检测TRF1、TRF2、RAP1、TZAP蛋白表达水平改变及相关性
        4.3 RT-PCR检测TRF1、TRF2、RAP1、TZAP mRNA表达水平改变
第三部分 讨论
    1.中医学对于急性白血病的认识
        1.1 病名溯源
        1.2 病因病机
        1.3 现代中医药对于白血病的研究
    2.端粒相关蛋白
        2.1 端粒
        2.2 端粒结合蛋白复合体（Shelterin）
    3.芪莲益髓清毒颗粒组方及研究
        3.1 中药功效分析及现代药理研究
        3.2 立方原则及配伍特点
    4.中医“祛邪扶正法”在治疗急性白血病中的作用
    5.研究结果分析
        5.1 芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病疗效的临床观察
        5.2 芪莲益髓清毒颗粒诱导NB4 细胞凋亡及影响4 种端粒相关蛋白表达研究的体外实验
结语
参考文献
综述
    参考文献
致谢
附录
发表文章

【参考文献】

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本文编号：2894303