miR-6838通过介导Rb通路促进膀胱癌生长和侵袭的能力及其机制研究

发布时间：2020-12-17 09:06

　　研究背景:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类的健康。探明膀胱癌的发生发展机制,寻找新的治疗靶点是改善膀胱癌患者预后的关键。microRNA是由大约为22个核糖核苷酸组成的非编码单链RNA分子。大量的报道显示出,microRNA在诸多肿瘤中都呈现为异常表达,并影响细胞内癌症相关基因的表达与调控,从而影响肿瘤的发生发展过程。mirco RNA已经成为新型的肿瘤分子标志物及治疗靶点。Rb基因是常见的抑癌基因。Rb基因的突变或异常表达与癌症的进展密切相关。我们通过查阅相关的文献和前期的筛选,假设miR-6838可能通过抑制Rb通路诱发膀胱癌,但上述科学假设仍有待进一步的研究来证实。研究目的:本课题拟阐明miR-6838调控膀胱癌细胞增殖与侵袭能力的分子机制,探讨miR-6838介导膀胱癌发生发展的可能机制,为后续靶向miR-6838治疗膀胱癌提供理论依据。研究对象和方法:本研究中主要包括90例膀胱肿瘤临床样本（包括30例膀胱原位癌,30例T1/T2期膀胱癌和30例T3/T4期膀胱癌）的癌症手术中收集膀胱癌组织标本、T24膀胱肿瘤细胞系及HEK293T细胞。首先在转录及翻译水平,... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
主要英文缩写词表
第1章 文献综述
    一、突变的DNA修复基因在膀胱癌中的作用和意义
        1.1 膀胱癌的发病机制及治疗进展
            1.1.1 膀胱癌的发病机制即DDR基因的发现
            1.1.2 MIBC的新的治疗方法和靶点
        1.2 MIBC中DDR基因量的改变
            1.2.1 ERCC2在膀胱癌中的作用
            1.2.2 最常见的突变DDR基因ATM
            1.2.3 错配修复基因MMR
        1.3 MIBC中DDR基因生物学特性的改变
        1.4 目前的治疗方法在临床中的应用
    二、微小RNA概述
        2.1 miRNA
        2.2 miRNA生物发生途径
            2.2.1 转录
            2.2.2 由Drosha和Dicer处理
            2.2.3 RISC
            2.2.4 替代途径
        2.3 miRNA靶标鉴定
            2.3.1 生物信息学目标预测
            2.3.2 生化目标识别
            2.3.3 基于组学的靶标识别策略
        2.4 miRNA调节途径
        2.5 miRNAs的生物学作用
        2.6 疾病中miRNA的失调
            2.6.1 癌症中miRNA的表达
            2.6.2 miRNA与代谢性疾病
            2.6.3 病毒的发病机理
        2.7 miRNA的诊断标记
            2.7.1 miRNA的检测方法
            2.7.2 细胞外液的miRNA
        2.8 miRNA作为治疗靶点
            2.8.1 miRNA的模仿和抑制剂
            2.8.2 miRNA通路的小分子抑制剂
        2.9 基因组编辑方法
    三、Rb通路在抑癌功能，干细胞，代谢和炎症反应中的作用
        3.1 Rb基因突变与肿瘤
            3.1.1 RB基因失活与视网膜母细胞瘤
            3.1.2 Rb在肿瘤进展中的作用机制
        3.2 Rb失活诱导的干细胞样特征
        3.3 Rb的失活促进促炎信号传导
        3.4 Rb失活细胞内ROS微调的调节反馈机制
        3.5 RB对促炎因子的转录和转录后调控
引言
第2章 实验部分
    第一部分 MiR-6838和Rb在膀胱癌细胞和组织中的表达研究
        1 实验材料
            1.1 膀胱癌细胞
            1.2 膀胱癌癌组织及癌旁组织
            1.3 主要仪器
            1.4 主要试剂
            1.5 主要溶剂配制
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 实时荧光定量PCR分析
            2.3 Western blot
            2.4 统计分析
        3 结果
            3.1 膀胱癌组织中MiR-6838表达水平的检测
            3.2 膀胱癌细胞中MiR-6838表达水平的检测
            3.3 膀胱癌细胞中Rb蛋白表达水平的检测
        4 小结
    第二部分 MiR-6838对膀胱癌细胞生物学行为的影响
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 细胞转染
            2.3 荧光定量PCR分析
            2.4 细胞侵袭实验
            2.5 细胞增殖和凋亡检测
            2.6 统计分析
        3 结果
            3.1 MiR-6838过表达对膀胱癌细胞生物学行为的影响
                3.1.1 MiR-6838过表达对膀胱癌细胞增殖的影响
                3.1.2 MiR-6838过表达对膀胱癌细胞凋亡的影响
                3.1.3 MiR-6838过表达对膀胱癌细胞侵袭的影响
            3.2 抑制MiR-6838表达对膀胱癌细胞生物学行为的影响
                3.2.1 抑制MiR-6838表达对膀胱癌细胞增殖的影响
                3.2.2 抑制MiR-6838表达对膀胱癌细胞凋亡的影响
                3.2.3 抑制MiR-6838表达对膀胱癌细胞侵袭的影响
        4 小结
    第三部分 MiR-6838靶基因及其促癌机制初步研究
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 'UTR萤光素酶基因报道分析
            2.3 细胞侵袭实验
            2.4 细胞增殖和凋亡检测
            2.5 Western blot
            2.6 统计分析
        3 结果
            3.1 MiR-6838直接靶向Rb基因
            3.2 调节MiR-6838对Rb蛋白及细胞周期蛋白和侵袭相关蛋白的影响
            3.3 调节Rb蛋白对T24细胞的增殖、凋亡和侵袭能力的影响
        4 小结
第3章 讨论
第4章 全文结论
第5章 参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Retinoblastoma tumor suppressor functions shared by stem cell and cancer cell strategies[J]. Susumu Kohno,Shunsuke Kitajima,Nobunari Sasaki,Chiaki Takahashi.  World Journal of Stem Cells. 2016(04)



本文编号：2921775