HBX通过上调PTEN甲基化调控PI3K/Akt通路抑制HepG2细胞凋亡

发布时间：2020-12-17 13:06

　　目的:从PTEN甲基化调控PI3K/Akt通路的角度,阐明HBX抑制HepG2细胞凋亡的机制,为更深入认识HBX基因对肝癌的生物学作用机制及寻找抗癌治疗的药物新靶点奠定基础。方法:根据是否转染HBX基因及加入5-Aza-Cd R药物处理,将实验分为五组:转染pCMV（+）-HBX质粒组、转染pCMV（+）-空质粒组、空白组（未转染质粒）、转染pCMV（+）-HBX质粒+5-Aza-CdR组、转染pCMV（+）-空质粒+5-Aza-CdR组。体外培养人肝癌细胞HepG2细胞,采用瞬时转染法转染HBX基因,使用荧光显微镜观察HepG2细胞转染效率;利用流式细胞仪（FCM）检测各组HepG2细胞的凋亡水平;利用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测各组HepG2细胞中PTEN甲基化及非甲基化水平;采用RT-PCR、Western Blot检测各组HepG2细胞中PTEN、DNMT3A和p-Akt/Akt的表达。结果:基因测序结果显示成功构建了过表达重组质粒pCMV（+）-HBX。荧光显微镜观察HepG2细胞瞬时转染pCMV（+）-HBX及pCMV（+）-空质粒后,转染效率在80%之间,可用于后... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要英文缩略词索引
第1章 前言
第2章 主要实验材料及仪器设备
    2.1 主要实验材料
    2.2 主要仪器设备
    2.3 主要溶液配制
第3章 实验方法
    3.1 实验分组
    3.2 细胞培养
    3.3 质粒扩增及提取
    3.4 瞬时转染
    3.5 普通 PCR（RT-PCR）
    3.6 甲基化特异性 PCR（MSP）
    3.7 Western Blot
    3.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
    3.9 统计学方法
第4章 实验结果
    4.1 过表达 HBVgp3（HBX）基因重组质粒的构建
    4.2 测序结果
    4.3 瞬时转染后计算转染效率
    4.4 流式细胞仪检测各组 HepG2 细胞凋亡水平
    4.5 RT-PCR 检测各组 HepG2 细胞中 PTEN mRNA 的表达水平
    4.6 Western Blot 检测各组 HepG2 细胞中 PTEN 蛋白的表达水平
    4.7 MSP 检测各组 HepG2 细胞中 PTEN 基因甲基化及非甲基化的表达水平
    4.8 Western Blot 检测各组 HepG2 细胞中 DNMT3A 蛋白的表达水平
    4.9 Western Blot 检测各组 HepG2 细胞中 p-Akt/Akt 蛋白的相对表达水平
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌表观遗传学研究的进展[J]. 汪文,黄卫.  国际消化病杂志. 2013(02)
[2]乙肝病毒X蛋白对不同肝细胞系凋亡的诱导作用[J]. 杨倩,邓志华,贺丹丹.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(04)
[3]HBx-induced reactive oxygen species activates hepatocellular carcinogenesis via dysregulation of PTEN/Akt pathway[J]. Hye-Lin Ha,Dae-Yeul Yu.  World Journal of Gastroenterology. 2010(39)
[4]肝癌表观遗传学研究进展[J]. 黄健.  中国科学(C辑:生命科学). 2008(10)

博士论文
[1]PTEN基因在慢性淋巴细胞白血病中的表达及其调控研究[D]. 邹志建.南京医科大学 2014



本文编号：2922092