人骨髓间充质干细胞通过SDF-1α/CXCR4轴调控胃癌KATO-Ⅲ细胞生物学特性的研究
发布时间：2020-12-19 05:39
目的研究人骨髓间充质干细胞对胃癌KATO-III细胞生物学特性的调控机制。材料与方法利用Transwell小室构建人胃癌细胞和骨髓间充质干细胞的非接触共培养模型,进而将KATO-III细胞分为KATO-III细胞单独培养组和KATO-III细胞与BMSCs非接触共培养组,分别予以SDF-1α刺激、或/和阻滞剂（AMD3100或LY294002）阻滞。观察SDF-1α刺激KATO-III细胞2h后的刺激作用。进而观察AMD3100或LY294002预处理KATO-III细胞30 min后,再加入SDF-1α刺激两小时后的效应变化。此外,亦以无SDF-1α刺激为对照,由此分为不同亚组（表2）。所有检测的目的细胞均为KATO-III细胞。采用CCK-8法检测各组KATO-III细胞的增殖能力以及对氟尿嘧啶（5-FU）和顺铂的敏感性,Transwell小室法检测其侵袭能力,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法鉴定CD133、CXCR4、凋亡相关因子及上皮-间质转化因子的表达。结果与单独培养相比,BMSCs可调控KATO-III细胞干细胞相关标记物的表达,促进KATO-III细胞增殖能力（...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BMSCs迁移至肿瘤微环境Fig1.bonemarrowmesenchymalstemcellsmigrationtocancermicroenvironment[13]
3) 取2ml人BMSCs悬液加入共培养系统下室，1ml肿瘤细胞悬液加入上室进行培养，3天后用0.25%EDTA胰蛋白酶消化，收集细胞行后续实验检测。图2. 非接触共培养模型示意图Fig 2 .the diagram of noncontact co-culture model注：A: 非接触共培养模型示意图；B:所用的Transwell小室六孔板；C:倒置显微镜示Transwell小室中的KATO-III细胞(×200)；D:倒置显微镜示六孔板下层的BMSC细胞(×200)；1.2.8 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）1) 胃癌 KATO-III 细胞株中总 RNA 的提取a. 提取各组共培养和单独培养组的 KATO-III 细胞，在各组细胞沉淀中加入 1mLTrizol，充分吹打混匀后吸入 1.5mL EP 管中，室温静置 5min。0.4μm 孔径半透膜
图 3. 共培养前后两种细胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表达Fig 3. the expression of mRNA of TGF-βand SDF-1 before and after co-culture注：A: RT-PCR 检测共培养组与单独培养组两种细胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表达电泳条带图；B:共培养组与单独培养组两种细胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表达柱状图；
【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化及促进干细胞特性获得的研究[J]. 蔡成,俞继卫,吴巨钢,陆瑞祺,倪晓春,王守练,姜波健. 国际外科学杂志. 2012 (12)
[2]基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4轴经PI3K/Akt通路对胃癌细胞CD133表达的调控作用[J]. 姜海广,陆瑞祺,吴巨钢,周国才,俞继卫,姜波健. 中华实验外科杂志. 2012 (03)
本文编号：2925356
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BMSCs迁移至肿瘤微环境Fig1.bonemarrowmesenchymalstemcellsmigrationtocancermicroenvironment[13]
3) 取2ml人BMSCs悬液加入共培养系统下室，1ml肿瘤细胞悬液加入上室进行培养，3天后用0.25%EDTA胰蛋白酶消化，收集细胞行后续实验检测。图2. 非接触共培养模型示意图Fig 2 .the diagram of noncontact co-culture model注：A: 非接触共培养模型示意图；B:所用的Transwell小室六孔板；C:倒置显微镜示Transwell小室中的KATO-III细胞(×200)；D:倒置显微镜示六孔板下层的BMSC细胞(×200)；1.2.8 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）1) 胃癌 KATO-III 细胞株中总 RNA 的提取a. 提取各组共培养和单独培养组的 KATO-III 细胞，在各组细胞沉淀中加入 1mLTrizol，充分吹打混匀后吸入 1.5mL EP 管中，室温静置 5min。0.4μm 孔径半透膜
图 3. 共培养前后两种细胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表达Fig 3. the expression of mRNA of TGF-βand SDF-1 before and after co-culture注：A: RT-PCR 检测共培养组与单独培养组两种细胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表达电泳条带图；B:共培养组与单独培养组两种细胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表达柱状图；
【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化及促进干细胞特性获得的研究[J]. 蔡成,俞继卫,吴巨钢,陆瑞祺,倪晓春,王守练,姜波健. 国际外科学杂志. 2012 (12)
[2]基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4轴经PI3K/Akt通路对胃癌细胞CD133表达的调控作用[J]. 姜海广,陆瑞祺,吴巨钢,周国才,俞继卫,姜波健. 中华实验外科杂志. 2012 (03)
本文编号：2925356
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