NLRP3在白藜芦醇抑制肾癌中的作用研究
发布时间：2020-12-26 04:27
目的白藜芦醇（resveratrol,RSV）是一种天然多酚类化合物,广泛存在于葡萄、草莓和花生等食物中。RSV具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤的作用,还能够抵御肥胖、保护心血管、缓解阿尔兹海默症等。肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一,由于肾癌的发病机制并不是很清楚,且对化疗不敏感,常导致患者预后不良。已知炎症与癌症的发生发展密不可分,且具有相互促进的作用。炎症过程中发挥重要作用的炎症小体已得到广泛研究,其中NLRP3炎症小体最为熟知,而其在肾癌发生发展中的作用并不明确。我们希望通过观察RSV对肾癌的作用以及在此过程中NLRP3表达水平的变化来为寻找治疗肾癌的方法提供新思路。因此,本课题旨在研究RSV对肾癌的具体作用以及通过研究这一过程中炎症的变化,来揭示NLRP3在肾癌发生发展中的作用,并为研究炎症与肿瘤的关系提供新的线索。方法1.CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验检测RSV对ACHN和786-O细胞的生长抑制作用。2.划痕实验检测RSV对ACHN和786-O细胞迁移能力的影响。3.Transwell实验检测RS...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
白藜芦醇分子结构
酶前体 pro-Caspase-1，三者形成的蛋白复合体即为 NLRP3 炎症小体。炎症小体形成后将 pro-Caspase-1 激活，活化的 Caspase-1 可将 IL-1β 前体（pro-IL-1β）和IL-18 前体（pro-IL-18）剪切为有活性的 IL-1β 和 IL-18，成熟的 IL-1β 和 IL-18分泌到胞外促进炎症反应[46]。炎症小体与多种疾病有关，如痛风[55]、2 型糖尿病[56]、动脉粥样硬化[57]、阿尔兹海默病[58]、肿瘤[59]等。NLRP3 炎症小体在许多肿瘤中已经被认为是一种促进肿瘤发生发展的重要因素，比如肺癌[60]、膀胱癌[61]、急性淋巴细胞白血病[62]等。Melvyn 等认为，NLRP3可以通过抑制 NK 细胞来促进肿瘤转移。在黑素瘤和前列腺癌肺转移模型中，敲除 NLRP3 基因的小鼠肺转移灶数量少，证明 NLRP3 具有促进肿瘤转移的作用，并且这种促进转移的过程不依赖于 Caspase-1。此外，NLRP3 敲除的小鼠是通过NK 细胞的作用来减少肿瘤转移的，而不是 T 细胞，而且在该种小鼠体内 NK 细胞活力增强，后者可以通过分泌 IFN-γ 来抑制肿瘤转移。研究还发现，造血细胞表达 NLRP3 对于癌细胞转移也有促进作用[63]。然而，Jeremy 等发现，NLRP3炎症小体可以通过促进 NK 细胞杀肿瘤活力来抑制结肠癌肝转移，且这一过程由IL-18 介导而不是 IL-1β[64]。
为了检测 RSV 对于肾癌细胞生长活性的影响，本实验选取了不同浓度（25μM、50 μM、100 μM）的 RSV 处理肾癌细胞，同时对于 RSV 的处理时间分别选取了 0 h、12 h、24 h，处理结束后加入 CCK-8 试剂进行检测，计算肾癌细胞存活率。结果显示，对于 ACHN 细胞，RSV 浓度为 25 μM 时，0 h、12 h、2 4h的存活率分别为 100 %、86.53 %、74.81 %；50 μM 时，0 h、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、83.08 %、69.72 %；100 μM 时，0 h、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、76.27 %、61.20 %。对于 786-O 细胞，RSV 浓度为 25 μM 时，0 h、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、86.53 %、74.81 %；50 μM 时，0 h 、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、89.55 %、70.84 %；100 μM 时，0 h、12 h、24 h的存活率分别为 100 %、73.32 %、40.91 %。从结果我们可以看出，在相同 RSV浓度下，两种肾癌细胞的存活率随着 RSV 处理时间的延长而降低；在相同处理时间下，两种肾癌细胞的存活率随着 RSV 浓度的升高而降低。各组之间相比均有显著性差异。因此可以看出，两种肾癌细胞的存活率对于 RSV 的处理具有时间依赖性和浓度依赖性。根据公式计算 24 h 的 IC50 选取 100 μM 作为后续实验条件。
【参考文献】：
期刊论文
[1]二甲双胍抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移的作用及其机制[J]. 王方炜,李超乾. 广西医科大学学报. 2020(07)
本文编号：2939035
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
白藜芦醇分子结构
酶前体 pro-Caspase-1，三者形成的蛋白复合体即为 NLRP3 炎症小体。炎症小体形成后将 pro-Caspase-1 激活，活化的 Caspase-1 可将 IL-1β 前体（pro-IL-1β）和IL-18 前体（pro-IL-18）剪切为有活性的 IL-1β 和 IL-18，成熟的 IL-1β 和 IL-18分泌到胞外促进炎症反应[46]。炎症小体与多种疾病有关，如痛风[55]、2 型糖尿病[56]、动脉粥样硬化[57]、阿尔兹海默病[58]、肿瘤[59]等。NLRP3 炎症小体在许多肿瘤中已经被认为是一种促进肿瘤发生发展的重要因素，比如肺癌[60]、膀胱癌[61]、急性淋巴细胞白血病[62]等。Melvyn 等认为，NLRP3可以通过抑制 NK 细胞来促进肿瘤转移。在黑素瘤和前列腺癌肺转移模型中，敲除 NLRP3 基因的小鼠肺转移灶数量少，证明 NLRP3 具有促进肿瘤转移的作用，并且这种促进转移的过程不依赖于 Caspase-1。此外，NLRP3 敲除的小鼠是通过NK 细胞的作用来减少肿瘤转移的，而不是 T 细胞，而且在该种小鼠体内 NK 细胞活力增强，后者可以通过分泌 IFN-γ 来抑制肿瘤转移。研究还发现，造血细胞表达 NLRP3 对于癌细胞转移也有促进作用[63]。然而，Jeremy 等发现，NLRP3炎症小体可以通过促进 NK 细胞杀肿瘤活力来抑制结肠癌肝转移，且这一过程由IL-18 介导而不是 IL-1β[64]。
为了检测 RSV 对于肾癌细胞生长活性的影响，本实验选取了不同浓度（25μM、50 μM、100 μM）的 RSV 处理肾癌细胞，同时对于 RSV 的处理时间分别选取了 0 h、12 h、24 h，处理结束后加入 CCK-8 试剂进行检测，计算肾癌细胞存活率。结果显示，对于 ACHN 细胞，RSV 浓度为 25 μM 时，0 h、12 h、2 4h的存活率分别为 100 %、86.53 %、74.81 %；50 μM 时，0 h、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、83.08 %、69.72 %；100 μM 时，0 h、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、76.27 %、61.20 %。对于 786-O 细胞，RSV 浓度为 25 μM 时，0 h、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、86.53 %、74.81 %；50 μM 时，0 h 、12 h、24 h 的存活率分别为 100 %、89.55 %、70.84 %；100 μM 时，0 h、12 h、24 h的存活率分别为 100 %、73.32 %、40.91 %。从结果我们可以看出，在相同 RSV浓度下，两种肾癌细胞的存活率随着 RSV 处理时间的延长而降低；在相同处理时间下，两种肾癌细胞的存活率随着 RSV 浓度的升高而降低。各组之间相比均有显著性差异。因此可以看出，两种肾癌细胞的存活率对于 RSV 的处理具有时间依赖性和浓度依赖性。根据公式计算 24 h 的 IC50 选取 100 μM 作为后续实验条件。
【参考文献】：
期刊论文
[1]二甲双胍抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移的作用及其机制[J]. 王方炜,李超乾. 广西医科大学学报. 2020(07)
本文编号：2939035
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