预警素对外泌体介导的肝癌免疫治疗作用研究

发布时间：2021-01-03 08:17

　　目的:肝癌是一类侵袭性强、死亡率高,对临床治疗反应差的恶性肿瘤,目前临床上缺乏有效治疗手段。近年来,肿瘤来源的exosome（TEX）作为抗原有效载体在肿瘤免疫治疗中取得可喜进展,本实验室在前期工作中,证明TEX可作为肝癌抗原的有效运输载体,促进树突状细胞成熟和活化,从而在荷瘤小鼠上介导有效的抑瘤作用。然而,针对肝癌的复杂免疫微环境,亟需研发能够进一步提高树突状细胞免疫原性的新策略。有研究表明:预警素,特别是high mobility group nucleosome-binding protein 1（HMGN1）,具有招募树突状细胞（DC）及促进树突状细胞活化的作用,被广泛用作新型的免疫佐剂,但其在肝癌免疫治疗中的应用潜力有待研究。因此,在本研究中,拟利用基因工程及本实验室创建的exosomes功能化修饰平台,在肝癌体外、体内模型上,系统研究HMGN1在肝癌免疫治疗中的可行性及潜力。方法:通过慢病毒转染肝癌Hepa1-6细胞系,以获得稳定表达HMGN1蛋白的Hepa1-6细胞(Hepa1-6_HMGN1);通过比较Hepa1-6_HMGN1细... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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Hepa1-6HMGN1细胞系的建立及体外验证

天津医科大学硕士学位论文 结果2A），说明 HMGN1 蛋白表达不影响肝癌细胞的体外增殖速率。为进一步评估HMGN1 蛋白对肝癌细胞成瘤性的影响，我们将 5x105的 Hepa1-6HMGN1与Hepa1-6 细胞分别接种到野生型 C57/BL6 小鼠腹股沟，在接种七天后，开始测量小鼠皮下瘤大小。结果发现：Hepa1-6HMGN1皮下瘤的生长速率显著慢于Hepa1-6（图 2B-C）。对 Hepa1-6HMGN1荷瘤鼠生存期的测试结果表明：与 Hepa1-6皮下瘤相比，Hepa1-6HMGN1荷瘤鼠生存期显著延长（图 2D）。以上结果说明，由于细胞表达 HMGN1 蛋白，Hepa1-6 皮下瘤的生长速度受到了明显的抑制，这表明 HMGN1 蛋白在抗肿瘤免疫中发挥了关键的作用。

科大学硕士学位论文 过膜融合及细胞吞噬作用等方式参与到机体免疫当中[36,37]。了获得纯度较高，形态结构完整的 exosomes，我们选取 Hepa1-6细胞，通过超速离心和蔗糖梯度纯化的方式提纯细胞培养上清mes。通过电镜观察及纳米颗粒跟踪分析仪分析纯化后的 exosomes经过蔗糖梯度纯化后的 exosomes 形态均一，结构完整，可以观察膜结构（图 3A-B）。为了检测纯化后的 exosomes 上的蛋白表达WB 技术检测 exosomes 上的蛋白表达情况。结果表明：蔗糖梯度mes 表面携带有其源细胞系 Hepa1-6 所带有的肝癌标志性抗原 AFPALIX 作为 exosomes 的内参蛋白表达（图 3C）。这些结果说明经somes 可作为有效的肝癌特异性抗原载体。


本文编号：2954642