miRNAs对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响

发布时间：2021-01-27 20:15

　　目的筛选分析癌症基因组图谱（The cancer genome atlas,TCGA）数据库中,与正常肝组织相比在肝癌组织中差异表达的MicroRNAs（miRNAs）,细胞表型实验检测差异表达的miRNAs（Different expression miRNAs,DEM）对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结合生物信息学方法预测并筛选差异表达miRNAs的候选靶基因,并验证miR-33b-5p对靶基因基质金属蛋白酶16（Matrix metalloproteinase-16,MMP16）的作用,进一步验证miR-33b-5p调控肝癌细胞增殖和迁移的分子机制,为肝癌的分子机制及其早期诊断提供有力的理论依据。方法1通过TCGA数据库对肝癌患者进行分析,筛选出具有差异表达的miRNAs,对其中差异表达最明显的miRNAs进行物种保守性的分析,将物种保守性较高的miRNAs进行生存曲线的分析,筛选出与总生存率相关的miRNAs在肝癌患者不同临床分期中的表达。2选择正常肝细胞LO2、肝癌细胞HepG2和SMMC-7721,应用qRT-PCR检测miR-767-5p、miR-183-5p、mi... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第1章 TCGA数据库中临床肝癌组织miRNAs的表达
    1.1 TCGA数据库中临床肝癌组织相关数据的获取
        1.1.1 肝癌组织中差异表达miRNAs的筛选
        1.1.2 肝癌组织中差异表达miRNAs物种保守性的筛选
        1.1.3 肝癌组织中差异表达miRNAs与肝癌患者生存期的筛选
        1.1.4 肝癌组织中差异表达miRNAs与肝癌患者临床资料的分析
        1.1.5 qRT-PCR验证正常肝细胞LO2和肝癌细胞miRNAs的表达水平
    1.2 结果
        1.2.1 差异表达miRNAs在肝癌组织中的分析
        1.2.2 差异表达miRNAs物种保守性的分析
        1.2.3 差异表达miRNAs与肝癌患者生存期的分析
        1.2.4 差异表达miRNAs与肝癌患者临床特征的分析
        1.2.5 差异表达miRNAs在肝癌组织中的表达
    1.3 讨论
    1.4 小结
第2章 miRNAs对肝癌细胞生物学行为的影响
    2.1 主要实验仪器和试剂
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 qRT-PCR检测正常肝细胞LO2 和肝癌细胞HepG2、SMMC-7721中miRNAs的表达水平
        2.2.3 CCK8检测miRNAs对肝癌细胞HepG2和SMMC-7721 增殖能力的影响
        2.2.4 Transwell检测miR-33b-5p对肝癌细胞HepG2迁移能力的影响
        2.2.5 Transwell检测miR-33b-5p对肝癌细胞HepG2侵袭能力的影响
    2.3 实验结果
        2.3.1 qRT-PCR检测miRNAs表达水平
        2.3.2 miRNAs对肝癌细胞增殖能力影响
        2.3.3 miRNAs对肝癌细胞迁移能力影响
        2.3.4 miRNAs对肝癌细胞侵袭能力影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 miR-33b-5p在肝癌细胞中靶基因的确定
    3.1 实验试剂和仪器
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 miR-33b-5p靶基因的筛选
        3.2.2 荧光报告载体的构建
        3.2.3 荧光素酶实验验证MMP16是miR-33b-5p的靶基因
        3.2.4 qRT-PCR检测miR-33b-5p对肝癌细胞中MMP16mRNA表达水平的影响
        3.2.5 Westernblot检测miR-33b-5p对肝癌细胞中MMP16 蛋白表达水平的影响
        3.2.6 统计学处理
    3.3 结果
        3.3.1 miR-33b-5p候选靶基因的预测
        3.3.2 荧光素酶实验验证MMP16是miR-33b-5p的靶基因
        3.3.3 miR-33b-5p对肝癌细胞中MMP16 mRNA表达水平的影响
        3.3.4 miR-33b-5p对肝癌细胞中MMP16 蛋白表达水平的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
参考文献
结论
第4章 综述
    4.1 肝癌的近况
    4.2 miRNAs的简介
    4.3 miRNAs与肿瘤的关系
    4.4 具有癌基因作用的miRNAs
        4.4.1 miR-767与肿瘤
        4.4.2 miR-184与肿瘤
        4.4.3 miR-183与肿瘤
        4.4.4 miR-205与肿瘤
    4.5 具有抑癌基因作用的miRNAs
        4.5.1 miR-1258与肿瘤
        4.5.2 miR-490与肿瘤
        4.5.3 miR-139与肿瘤
        4.5.4 miR-33b与肿瘤
    参考文献
致谢
在学期间研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Validation of a serum microRNA panel as biomarkers for early diagnosis of hepatocellular carcinoma post-hepatitis C infection in Egyptian patients[J]. Moustafa Nouh Elemeery,Ahmed Noah Badr,Marwa Anwar Mohamed,Doaa Ahmed Ghareeb.  World Journal of Gastroenterology. 2017(21)
[2]MicroRNAs as possible biomarkers for diagnosis and prognosis of hepatitis b- and c-related-hepatocellularcarcinoma[J]. Sirio Fiorino,Maria Letizia Bacchi-Reggiani,Michela Visani,Giorgia Acquaviva,Adele Fornelli,Michele Masetti,Andrea Tura,Fabio Grizzi,Matteo Zanello,Laura Mastrangelo,Raffaele Lombardi,Luca Di Tommaso,Arrigo Bondi,Sergio Sabbatani,Andrea Domanico,Carlo Fabbri,Paolo Leandri,Annalisa Pession,Elio Jovine,Dario de Biase.  World Journal of Gastroenterology. 2016(15)
[3]Guide for diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma[J]. Magdy Hamed Attwa,Shahira Aly El-Etreby.  World Journal of Hepatology. 2015(12)
[4]MicroRNA-184 promotes proliferation ability of glioma cells by regulating FOXO3[J]. Qing-Ke Cui,Wei-Dong Liu,Jian-Xin Zhu,Yun-Hua Wang,Zhi-Gang Wang.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014(10)



本文编号：3003662