口腔鳞癌中肿瘤相关巨噬细胞的来源及促癌细胞获得干性的研究

发布时间：2021-02-01 02:26

　　研究目的:探讨口腔鳞癌组织中肿瘤相关巨噬细胞（Tumor associated macrophages,TAMs）的来源,检测其对口腔舌鳞癌细胞系Cal-27细胞干性转化的影响,为未来以TAMs为靶点的肿瘤免疫治疗提供理论基础。研究方法:1.首先利用免疫组织化学染色检测TAMs在组织内的分布浸润情况。收集不同细胞的上清液作为条件培养基（conditional media,CM）,利用transwell共培养体系检测不同CM对单核细胞的趋化作用。Real-Time PCR方法检测相关细胞趋化因子（CCL2、CCL3、CXCL12、CXCL16、CSF-1）和M2型相关基因（CD163、CD206、Arg1）的表达;2.其次体外利用佛波酯（PMA）和白介素-4（interleukin 4,IL-4）诱导形成M2型巨噬细胞。建立M2型巨噬细胞和Cal-27细胞共培养系统,分别用Real-Time PCR和免疫荧光检测M2型巨噬细胞对Cal-27细胞相关干性标志物的影响,MTT检测M2型巨噬细胞对Cal-27细胞耐药性和增殖的作用,流式细胞术检测M2型巨噬细胞对Cal-27细胞凋亡的作用,克隆... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫组织化学染色检测巨噬细胞分布(10x10)

利用Transwell共培养体系检测单核细胞THP-1的募集。荧光显微镜下观察可见，与空白对照组、正常上皮细胞组、口腔鳞癌细胞组相比，CAFs可趋化更多的单核细胞。如图2.2A、B、C、D分别为con、Hacat、Cal-27、CAFs组。

图2.2荧光显微镜观察THP-1细胞的趋化(20x10)al-Time PCR检测相关趋化因子的表达用Real-Time PCR检测不同趋化因子在细胞中的表达。如图2.3所示L2、CCL3、CXCL12、CXCL16、CSF-1在细胞中均存在不同程度的表Fs具有更强的趋化作用，且CAFs内CCL2、CCL3、CXCL12表达量P<0.001），猜测可能是这几种趋化因子引起单核细胞的趋化。


本文编号：3012031