靶向OX40主动免疫的抗肿瘤免疫效应

发布时间：2021-02-10 19:48

　　[背 景]CD8+T细胞在细胞免疫中起重要作用,是抗肿瘤的主要效应细胞,可识别特定的肿瘤抗原,进而分泌IFN-γ、穿孔素、颗粒酶等调节及发挥杀伤肿瘤细胞的作用。而Tregs能通过干扰肿瘤细胞的抗原提呈、表达抑制性受体、分泌抑制性分子、借助代谢调控如耗竭IL-2等机制,来抑制抗肿瘤效应细胞作用,从而帮助肿瘤细胞实现免疫逃逸。效应细胞与免疫抑制细胞的相互作用,决定了肿瘤的发展方向。肿瘤浸润的效应T细胞常因受到肿瘤及免疫抑制细胞的抑制信号传递,增殖、功能及生存受到显著抑制,无法有效识别并杀伤肿瘤细胞。目前临床上使用的免疫检查点抑制剂抗体（包括CTLA-4、PD-L1、PD-1等）,通过调控肿瘤微环境中的抑制性分子网络,即实现“免疫正常化”,取得了良好的疗效,是肿瘤免疫治疗的重大突破。然而,其仍存在显著不足,如临床响应率有限、系统性免疫激活副作用等。研究表明,在PD-L1高表达的癌症患者中,许多患者表现出了治疗耐药性。因此,仍需要探索更有效的单一和联合免疫疗法以增强免疫治疗效果。OX40（也被称作CD134/TNFRSF4）是第二代免疫检查点的代表性靶点之一,广泛表达于炎症和肿瘤部位,通过传递... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．０Ｘ４０研究状态分布图??

结果??１靶向小鼠０Ｘ４０的病毒样颗粒疫苗构建与制备??１．１以乙肝核心抗原病毒样颗粒为载体的０Ｘ４０疫苗构建。??经预测共获得７个潜在的抗原表位（Ｐ１－Ｐ７），利用基因重组的手段，在??ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ载体上构建诱导型且可稳定表达ＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０蛋白的ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０??质粒（图２）。将提取的载体质粒与ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０重组质粒分别应用和Ａ／＊??Ｉ进行双酶切鉴定，１％琼脂糖电泳分析显示（图３，以Ｐ６鉴定为代表），所获得??的重组质粒目的条带略大于载体质粒对应条带，与预期相符。重组质粒送至上海??生物工程股份有限公司测序，分析表明构建正确。??ＳａｍＨｆ?￡？０?阳？??ｆＨＢ？Ａ〇．〇ｘ４〇ｉ??图２重组质粒ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０示意图??３０??

ｂｐ?Ｍ?ＮＰ?Ｐ６??Ｉ?ｃｏｏｌ??５００??图３重组质粒的酶切鉴定??Ｍ：?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ；?ＮＰ：载体质粒双酶切（Ｐ．ｓ．，１?＋齡Ｉ?）：?Ｐ６：重组质粒双酶切（朽／??１?＋齡?Ｉ?）。??１．２重组蛋白的诱导表达及纯化??１．２．１?ＨＢｃＡｇ－ＯＸ４ｆｌ重组蛋白的诱导表达??转化了重组质粒的ＤＨ５ｃｉ閑于液体ＬＢ培养基中培养，经ＩＰＴＧ诱导后，??ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示重组菌都有效表达了目的蛋白（Ｐ１－Ｐ７），其理论分子量分别??约为?１９０００Ｄａ，丨?８９００?Ｄａ，?１８６００?Ｄａ，?１９０００?Ｄａ，丨８７００?Ｄａ，?１９０００?Ｄａ，１８６００?Ｄａ，??略大于载体质粒编码的蛋白ＨＢｃＡｇ?（以ＮＰ代表，理论分子量为丨７５００?Ｄａ）。如??图４所示。??ｋＤａ?Ｍ?ＮＰ?ＰＩ?Ｐ２?Ｐ４?ＰＳ?Ｐ３?Ｐ６?Ｐ７??９７．２?一??６６．４?一??４４．３?＊?？?—??２９?一??２０．１?？?＿??■■?鑛轉??１４．３?＊?＾５５？—????３１??


本文编号：3027896