基于miR-602介导的RASSF1A/JNK通路对肝癌术后复发调控机制的研究
发布时间：2021-02-23 03:39
原发性肝癌是指发生在肝细胞或肝内胆管细胞的恶性肿瘤,其中肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）约占原发性肝癌发病率的90%。HCC病程具有进展速度快、转移率及复发率高的特点,是国内外对于HCC的诊治效果不理想的主要原因。中国作为肝癌的高发病率国家,患者人数仍在上升。截止目前为止,国内外治疗肝癌的手段主要包括手术、放化疗以及肝移植、靶向治疗、免疫治疗、中医药治疗等,但早期肝癌的主要治疗手段仍以手术为主。而导致肝癌患者死亡的最主要和最常见的原因是术后复发。因此保持肝癌术后休眠状态,抑制其复发,可有效地降低死亡率,从而提高生存期。目的:本课题预测肝癌细胞系SMMC7721中mi R-602表达的变化,可通过调节RASSF1A基因介导的磷酸化JNK信号通路促进癌细胞凋亡的作用,从而影响肝癌术后复发。方法:体外细胞实验部分:构建稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞系,在此基础上,进行mimic及inhibitor mi R-602的瞬时转染实验。通过检测各细胞系中mi R-602、RASSF1A与p-JNK、JNK、ATF-2和c-JUN、p-C-JUN的表...
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA的分子作用机制[26-28]
第二章miRNA-602通过靶向RASSF1A/JNK通路促进HCC细胞生长的作用机制（体外实验）19二、实验结果1.稳转RASSF1A的SMMC7721细胞系各实验组病毒转导效果良好，荧光率达80%以上。感染复数MOI：30。筛选药物及浓度：嘌呤霉素1.6μg/mL。药物筛选时间：4天。转导后药筛获得稳转株。a），b）过表达组-Pn+4-100xa)b)c），d）对照组-Pn+4-100xc)d)图2-1稳定表达RASSF1A基因的SMMC7721细胞系的荧光照片。(a，b)过表达组图像。(c，d)对照组图像。2.qPCR检测hRASSF1A基因在过表达组中的表达量是对照组的4125.7%。根据相对定量的方法检测目的基因的表达变化，按照2-ΔΔCT法对实验数据进行统计分析。样品名称hRASSF1A①hGAPDH②ΔCT(①-②)ΔΔCT（过表达组-对照组）2-ΔΔCT表达效率
华南理工大学硕士学位论文20过表达组16.54913.7082.842-5.36741.2574125.7%对照组21.89313.6858.20801100.0%a)b)图2-2a)hRASSF1A和b)hGAPDH的溶解曲线第三节RASSF1A通过JNK信号通路抑制SMMC7721细胞的增殖一、实验耗材、试剂及方法1.实验耗材、试剂BCA蛋白浓度测定试剂盒、PMSF、100×蛋白酶抑制剂、细胞刮刀、PBS缓冲液、负压吸引器、96孔板、酶标仪、碧云天凝胶配制试剂盒、15ml离心管、蛋白电泳装置、异丙醇、PVDF膜、脱脂奶粉、枪头、离心管、0.6mlEP管2.主要实验方法取第二节中获得的稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞及正常的SMMC7721细胞常规培养传代，稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞作为实验组，正常的SMMC7721细胞作为对照组。待细胞繁殖至对数生长期时收集细胞进行一下实验。1.1细胞总RNA的提取及浓度测定
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌介入治疗前后原癌基因Pokemon、甲胎蛋白异质体、甲胎蛋白、脱γ-羧基凝血酶原联合检测的临床价值[J]. 张全乐,邢喜芝,张立英,刘三香,李风艳. 安徽医药. 2017(03)
[2]Managements of recurrent hepatocellular carcinoma after liver transplantation: A systematic review[J]. Nicola de’Angelis,Filippo Landi,Maria Clotilde Carra,Daniel Azoulay. World Journal of Gastroenterology. 2015(39)
[3]健脾化瘀方促进小鼠肝癌休眠的作用及其免疫机制研究[J]. 黄旭晖,张晓文,梁荣华,郭苇,陈燕銮,王昌俊. 现代医院. 2014(09)
[4]小鼠肝癌休眠模型的建立[J]. 黄旭晖,王昌俊,张晓文,林举择,付婷婷. 中华肿瘤防治杂志. 2013(19)
[5]JNK信号通路在恶性肿瘤中的研究进展[J]. 李佳殷,林丽珠. 实用中医内科杂志. 2012(18)
[6]原发性肝癌术后早期复发密切相关microRNA的筛选及应用[J]. 邓治亮,孙建,区应亮,侯宝华,简志祥,区金锐. 中山大学学报(医学科学版). 2012(04)
[7]GSTP1和RASSF1A基因多态性和环境因素与前列腺癌的相关性分析[J]. 徐兴兴,常文军,侯建国,徐丹枫,崔心刚,翟羽佳,王国萍,张宏伟,曹广文. 第二军医大学学报. 2010(01)
[8]miRNA在HBV从感染经由肝硬化到肝癌进程中表达谱的变化[J]. 马兆龙,杨炼,陈立波,黄金明,王冬冬,王国斌. 世界华人消化杂志. 2009(20)
本文编号：3046959
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA的分子作用机制[26-28]
第二章miRNA-602通过靶向RASSF1A/JNK通路促进HCC细胞生长的作用机制（体外实验）19二、实验结果1.稳转RASSF1A的SMMC7721细胞系各实验组病毒转导效果良好，荧光率达80%以上。感染复数MOI：30。筛选药物及浓度：嘌呤霉素1.6μg/mL。药物筛选时间：4天。转导后药筛获得稳转株。a），b）过表达组-Pn+4-100xa)b)c），d）对照组-Pn+4-100xc)d)图2-1稳定表达RASSF1A基因的SMMC7721细胞系的荧光照片。(a，b)过表达组图像。(c，d)对照组图像。2.qPCR检测hRASSF1A基因在过表达组中的表达量是对照组的4125.7%。根据相对定量的方法检测目的基因的表达变化，按照2-ΔΔCT法对实验数据进行统计分析。样品名称hRASSF1A①hGAPDH②ΔCT(①-②)ΔΔCT（过表达组-对照组）2-ΔΔCT表达效率
华南理工大学硕士学位论文20过表达组16.54913.7082.842-5.36741.2574125.7%对照组21.89313.6858.20801100.0%a)b)图2-2a)hRASSF1A和b)hGAPDH的溶解曲线第三节RASSF1A通过JNK信号通路抑制SMMC7721细胞的增殖一、实验耗材、试剂及方法1.实验耗材、试剂BCA蛋白浓度测定试剂盒、PMSF、100×蛋白酶抑制剂、细胞刮刀、PBS缓冲液、负压吸引器、96孔板、酶标仪、碧云天凝胶配制试剂盒、15ml离心管、蛋白电泳装置、异丙醇、PVDF膜、脱脂奶粉、枪头、离心管、0.6mlEP管2.主要实验方法取第二节中获得的稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞及正常的SMMC7721细胞常规培养传代，稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞作为实验组，正常的SMMC7721细胞作为对照组。待细胞繁殖至对数生长期时收集细胞进行一下实验。1.1细胞总RNA的提取及浓度测定
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌介入治疗前后原癌基因Pokemon、甲胎蛋白异质体、甲胎蛋白、脱γ-羧基凝血酶原联合检测的临床价值[J]. 张全乐,邢喜芝,张立英,刘三香,李风艳. 安徽医药. 2017(03)
[2]Managements of recurrent hepatocellular carcinoma after liver transplantation: A systematic review[J]. Nicola de’Angelis,Filippo Landi,Maria Clotilde Carra,Daniel Azoulay. World Journal of Gastroenterology. 2015(39)
[3]健脾化瘀方促进小鼠肝癌休眠的作用及其免疫机制研究[J]. 黄旭晖,张晓文,梁荣华,郭苇,陈燕銮,王昌俊. 现代医院. 2014(09)
[4]小鼠肝癌休眠模型的建立[J]. 黄旭晖,王昌俊,张晓文,林举择,付婷婷. 中华肿瘤防治杂志. 2013(19)
[5]JNK信号通路在恶性肿瘤中的研究进展[J]. 李佳殷,林丽珠. 实用中医内科杂志. 2012(18)
[6]原发性肝癌术后早期复发密切相关microRNA的筛选及应用[J]. 邓治亮,孙建,区应亮,侯宝华,简志祥,区金锐. 中山大学学报(医学科学版). 2012(04)
[7]GSTP1和RASSF1A基因多态性和环境因素与前列腺癌的相关性分析[J]. 徐兴兴,常文军,侯建国,徐丹枫,崔心刚,翟羽佳,王国萍,张宏伟,曹广文. 第二军医大学学报. 2010(01)
[8]miRNA在HBV从感染经由肝硬化到肝癌进程中表达谱的变化[J]. 马兆龙,杨炼,陈立波,黄金明,王冬冬,王国斌. 世界华人消化杂志. 2009(20)
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