重离子辐照诱变干酪乳杆菌优良菌株选育及在抗结肠癌中的应用
发布时间：2021-03-08 05:34
结肠癌是发病于消化道的一种恶性肿瘤,近几年来,全球范围内的发病率和死亡率居高不下,严重威胁着人类的生命健康安全。2019年国家癌症中心公布的癌症发病率中结肠癌排名第三,达到38.8%。目前结肠癌治疗方式主要有手术切除、化学治疗和中药治疗,它们对结肠癌患者的治疗及康复有着重大的意义,但都存在一定的不足。手术治疗对肠道损伤大;化学治疗药物易产生抗药性,毒副作用大,中药治疗个体差异大;且均无预防结肠癌的功效。近年来研究发现,益生菌可以黏附在肠道表面,形成一层致密的屏障,阻止病原菌的定殖,并可以结合致癌物质排出体外,具有预防癌症的作用。此外,益生菌的细胞壁肽聚糖成分和次级代谢产物胞外多糖可以通过激活细胞免疫系统,增强巨噬细胞的吞噬功能、增强NK细胞的杀伤活性、增强T淋巴细胞介导的免疫应答反应等,从而增强机体的免疫功能,诱导癌细胞凋亡,对癌症的发生和发展有缓解作用。因此,开发一种对人体副作用小,治疗效果好,成本低、对结肠癌有预防和治疗效果的功能性益生菌制剂有重要的临床意义和应用价值。而优良菌株是制备益生菌制剂的关键前提,如何快速高效筛选益生菌优良菌株成为当下的研究热点。胃液的酸性环境及小肠中的胆...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院近代物理研究所)甘肃省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
019年中国癌症发病率统计
第2章JY菌株16SrDNA鉴定及其生物学特性研究15MRS琼脂平板上，于超净工作台中放置30min自然晾干。将标准药物纸片（诺氟沙星、头孢拉定、氨苄西林、头孢曲松）采用无菌镊子夹取，贴于平板表面，置37℃恒温培养箱中培养24h后观察其药敏性。2.2.7数据统计及分析实验数据采用统计软件SPSS20.0进行方差分析；P<0.05表示差异显著；P<0.01表示差异极显著。2.3结果与讨论2.3.1JY菌株16SrDNA鉴定结果测序结果显示，菌株JY的16SrDNAPCR产物片段为1439bp，将其16S序列进行BLAST比对，发现JY菌株与干酪乳杆菌序列同源性为99.99%，因此，确定JY菌株为干酪乳杆菌。16SrDNA序列提交至GeneBank，获得JY菌株NCBI登录号为MN400655。进化发育树如图2.1所示。图2.1JY菌株种属鉴定结果Figure2.1SpeciesidentificationofstrainJY2.3.2JY菌株生长曲线、产酸曲线测定干酪乳杆菌JY各个时间段的生长情况及产酸情况，结果如图2.2所示。
重离子辐照诱变干酪乳杆菌优良菌株选育及在抗结肠癌中的应用16由图2.2可知，JY菌株生长迅速，在2h到达对数期，24h到达稳定期，24h活菌数为1010CFU/mL，随着JY菌株的生长，产乳酸量不断增加，pH值也随之下降，进入稳定期后，pH值维持3.92在左右。JY菌株活菌数高，代谢产酸迅速，满足益生菌的三大必要条件之一。图2.2JY菌株生长曲线及产酸情况Figure2.2TheresultsofgrowthcurveandacidproductionofJYstrain2.3.3JY菌株耐酸性、耐胆盐性研究结果对干酪乳杆菌JY进行不同pH值下的酸处理及不同浓度的胆盐处理后存活情况如图2.3、2.4所示。从图2.3可以看出，JY菌株在不同pH的酸性培养基中仍然可以存活，且随着pH值的下降，JY的活菌数减少，存活率降低。pH从2到7，JY活菌数依次为lg7.30CFU/mL、lg8.52CFU/mL、lg9.56CFU/mL、lg9.78CFU/mL、lg10.40CFU/mL、lg10.44CFU/mL，卢承蓉等(2020)人选用的乳酸菌株L15、L15U2-26在pH2.0的培养基中作用3h后没有活菌生长，相比之下，JY菌株在pH2.0的培养基中作用12h后其活菌数达到lg7.30CFU/mL，说明JY菌株存在一定的酸耐受性。从图2.4可以看出，JY菌株在不同浓度的胆盐情况下，活菌数随着胆盐浓度的升高而降低。其在2.0%的胆盐中仍能存活；0%-2.0%胆盐中JY的活菌数分别为lg10.44CFU/mL、lg7.89
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-124在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响[J]. 周岗,宋鹏,杨靖. 解放军医学院学报. 2020(05)
[2]高产胞外多糖乳酸菌的诱变育种及其益生特性[J]. 卢承蓉,叶美芝,上官文丹,陈松,钟青萍. 食品与发酵工业. 2020(12)
[3]干酪乳杆菌发酵对发芽薏米营养组成和生物活性的影响[J]. 王清爽,高珊,朱灵灵,王晓乐,陈晓明,徐磊. 中国粮油学报. 2020(04)
[4]一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究[J]. 夏超笃,湛穗璋,艾琴,刘小艳,方炳虎. 中国畜牧兽医. 2020(02)
[5]高脂饮食与1,2-二甲基肼对大鼠肠道的作用及抗氧化机制研究[J]. 杜艳平,区俊文,习文韬,金昭延,杨鹏程. 海南医学. 2020(03)
[6]七叶皂苷钠对小鼠变应性接触性皮炎作用研究[J]. 王大贵,李梅,李竣,石召华,黄先菊. 中国民族民间医药. 2020(01)
[7]结直肠癌辅助化疗回顾与进展[J]. 王湘,赵林. 实用肿瘤杂志. 2019(06)
[8]缺氧环境下健脾消癌方对结肠癌裸鼠的抑瘤作用[J]. 宋琳,蒋益兰. 中医肿瘤学杂志. 2019(05)
[9]益生菌对免疫细胞的影响及其在自身免疫性疾病中的应用[J]. 史佳鹭,李慧臻,闫芬芬,关嘉琦,焦雯姝,赵莉,霍贵成. 食品工业科技. 2020(05)
[10]局部晚期肠癌患者术后卡培他滨单药维持治疗的临床观察[J]. 周文星,张文,宋超,戴发祥. 实用癌症杂志. 2019(09)
博士论文
[1]miR-223-3p在结肠癌发生发展中的功能及其机制研究[D]. 柴宝.山西医科大学 2019
[2]非编码RNA对结肠癌细胞重离子辐射敏感性的调节作用[D]. 李宏斌.中国科学院大学(中国科学院近代物理研究所) 2019
[3]乳酸菌胞外多糖的结构表征与诱导HT-29细胞凋亡作用研究[D]. 邸维.哈尔滨工业大学 2018
[4]胆盐水解酶提高乳酸菌胆盐耐受能力的酶学与生理学机制研究[D]. 毕洁.江南大学 2016
硕士论文
[1]不同解剖部位的结直肠癌病理特征及患者临床特点的比较分析[D]. 吴冰冰.吉林大学 2019
[2]人源干酪乳杆菌的筛选及其益生性能的研究[D]. 赵雪婷.南昌大学 2019
[3]结肠癌CME手术开腹与腔镜的近期临床效果研究[D]. 谢继光.山西医科大学 2019
[4]绿茶和葱属蔬菜的摄入降低结直肠癌的发病风险：一项基于医院的病例对照研究[D]. 吴鑫.中国医科大学 2019
[5]干酪乳杆菌发酵豆奶产肽的功能性研究[D]. 段楠.东北农业大学 2018
[6]Aspirin在结肠癌中对顺铂的增敏作用及其分子机制的研究[D]. 姜巍.大连医科大学 2018
[7]泥鳅肠道益生菌的筛选及应用研究[D]. 管婷婷.大连海洋大学 2016
[8]干酪乳杆菌N1115产酸特性及其在发酵乳中的应用[D]. 曹永强.北京工商大学 2016
[9]肠易激综合征腹泻型脾虚湿阻证与胃肠动力指标的研究[D]. 陈伟斌.广州中医药大学 2014
[10]植物乳杆菌ST-Ⅲ对肠上皮细胞的粘附性质及机理的研究[D]. 陈臣.江南大学 2008
本文编号：3070505
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院近代物理研究所)甘肃省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
019年中国癌症发病率统计
第2章JY菌株16SrDNA鉴定及其生物学特性研究15MRS琼脂平板上，于超净工作台中放置30min自然晾干。将标准药物纸片（诺氟沙星、头孢拉定、氨苄西林、头孢曲松）采用无菌镊子夹取，贴于平板表面，置37℃恒温培养箱中培养24h后观察其药敏性。2.2.7数据统计及分析实验数据采用统计软件SPSS20.0进行方差分析；P<0.05表示差异显著；P<0.01表示差异极显著。2.3结果与讨论2.3.1JY菌株16SrDNA鉴定结果测序结果显示，菌株JY的16SrDNAPCR产物片段为1439bp，将其16S序列进行BLAST比对，发现JY菌株与干酪乳杆菌序列同源性为99.99%，因此，确定JY菌株为干酪乳杆菌。16SrDNA序列提交至GeneBank，获得JY菌株NCBI登录号为MN400655。进化发育树如图2.1所示。图2.1JY菌株种属鉴定结果Figure2.1SpeciesidentificationofstrainJY2.3.2JY菌株生长曲线、产酸曲线测定干酪乳杆菌JY各个时间段的生长情况及产酸情况，结果如图2.2所示。
重离子辐照诱变干酪乳杆菌优良菌株选育及在抗结肠癌中的应用16由图2.2可知，JY菌株生长迅速，在2h到达对数期，24h到达稳定期，24h活菌数为1010CFU/mL，随着JY菌株的生长，产乳酸量不断增加，pH值也随之下降，进入稳定期后，pH值维持3.92在左右。JY菌株活菌数高，代谢产酸迅速，满足益生菌的三大必要条件之一。图2.2JY菌株生长曲线及产酸情况Figure2.2TheresultsofgrowthcurveandacidproductionofJYstrain2.3.3JY菌株耐酸性、耐胆盐性研究结果对干酪乳杆菌JY进行不同pH值下的酸处理及不同浓度的胆盐处理后存活情况如图2.3、2.4所示。从图2.3可以看出，JY菌株在不同pH的酸性培养基中仍然可以存活，且随着pH值的下降，JY的活菌数减少，存活率降低。pH从2到7，JY活菌数依次为lg7.30CFU/mL、lg8.52CFU/mL、lg9.56CFU/mL、lg9.78CFU/mL、lg10.40CFU/mL、lg10.44CFU/mL，卢承蓉等(2020)人选用的乳酸菌株L15、L15U2-26在pH2.0的培养基中作用3h后没有活菌生长，相比之下，JY菌株在pH2.0的培养基中作用12h后其活菌数达到lg7.30CFU/mL，说明JY菌株存在一定的酸耐受性。从图2.4可以看出，JY菌株在不同浓度的胆盐情况下，活菌数随着胆盐浓度的升高而降低。其在2.0%的胆盐中仍能存活；0%-2.0%胆盐中JY的活菌数分别为lg10.44CFU/mL、lg7.89
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-124在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响[J]. 周岗,宋鹏,杨靖. 解放军医学院学报. 2020(05)
[2]高产胞外多糖乳酸菌的诱变育种及其益生特性[J]. 卢承蓉,叶美芝,上官文丹,陈松,钟青萍. 食品与发酵工业. 2020(12)
[3]干酪乳杆菌发酵对发芽薏米营养组成和生物活性的影响[J]. 王清爽,高珊,朱灵灵,王晓乐,陈晓明,徐磊. 中国粮油学报. 2020(04)
[4]一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究[J]. 夏超笃,湛穗璋,艾琴,刘小艳,方炳虎. 中国畜牧兽医. 2020(02)
[5]高脂饮食与1,2-二甲基肼对大鼠肠道的作用及抗氧化机制研究[J]. 杜艳平,区俊文,习文韬,金昭延,杨鹏程. 海南医学. 2020(03)
[6]七叶皂苷钠对小鼠变应性接触性皮炎作用研究[J]. 王大贵,李梅,李竣,石召华,黄先菊. 中国民族民间医药. 2020(01)
[7]结直肠癌辅助化疗回顾与进展[J]. 王湘,赵林. 实用肿瘤杂志. 2019(06)
[8]缺氧环境下健脾消癌方对结肠癌裸鼠的抑瘤作用[J]. 宋琳,蒋益兰. 中医肿瘤学杂志. 2019(05)
[9]益生菌对免疫细胞的影响及其在自身免疫性疾病中的应用[J]. 史佳鹭,李慧臻,闫芬芬,关嘉琦,焦雯姝,赵莉,霍贵成. 食品工业科技. 2020(05)
[10]局部晚期肠癌患者术后卡培他滨单药维持治疗的临床观察[J]. 周文星,张文,宋超,戴发祥. 实用癌症杂志. 2019(09)
博士论文
[1]miR-223-3p在结肠癌发生发展中的功能及其机制研究[D]. 柴宝.山西医科大学 2019
[2]非编码RNA对结肠癌细胞重离子辐射敏感性的调节作用[D]. 李宏斌.中国科学院大学(中国科学院近代物理研究所) 2019
[3]乳酸菌胞外多糖的结构表征与诱导HT-29细胞凋亡作用研究[D]. 邸维.哈尔滨工业大学 2018
[4]胆盐水解酶提高乳酸菌胆盐耐受能力的酶学与生理学机制研究[D]. 毕洁.江南大学 2016
硕士论文
[1]不同解剖部位的结直肠癌病理特征及患者临床特点的比较分析[D]. 吴冰冰.吉林大学 2019
[2]人源干酪乳杆菌的筛选及其益生性能的研究[D]. 赵雪婷.南昌大学 2019
[3]结肠癌CME手术开腹与腔镜的近期临床效果研究[D]. 谢继光.山西医科大学 2019
[4]绿茶和葱属蔬菜的摄入降低结直肠癌的发病风险：一项基于医院的病例对照研究[D]. 吴鑫.中国医科大学 2019
[5]干酪乳杆菌发酵豆奶产肽的功能性研究[D]. 段楠.东北农业大学 2018
[6]Aspirin在结肠癌中对顺铂的增敏作用及其分子机制的研究[D]. 姜巍.大连医科大学 2018
[7]泥鳅肠道益生菌的筛选及应用研究[D]. 管婷婷.大连海洋大学 2016
[8]干酪乳杆菌N1115产酸特性及其在发酵乳中的应用[D]. 曹永强.北京工商大学 2016
[9]肠易激综合征腹泻型脾虚湿阻证与胃肠动力指标的研究[D]. 陈伟斌.广州中医药大学 2014
[10]植物乳杆菌ST-Ⅲ对肠上皮细胞的粘附性质及机理的研究[D]. 陈臣.江南大学 2008
本文编号：3070505
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