miRNA-7对食管癌细胞TE-1顺铂耐药的影响
发布时间：2017-04-16 14:18
本文关键词：miRNA-7对食管癌细胞TE-1顺铂耐药的影响，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：背景食管癌是我国常见的恶性肿瘤,目前以手术联合放化疗的综合治疗方案为主[1]。顺铂(DDP)是晚期食管癌的一线治疗药物,但较易产生耐药性[2]。顺铂主要作用于细胞的DNA,可导致DNA损伤并诱发细胞凋亡[3]。表皮生长因子受体(EGFR)是一种具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白,主要分布在细胞膜表面,与其配体结合发挥生物学效应。研究发现,细胞核内EGFR可通过调节DNA修复,影响肿瘤细胞对顺铂和放疗的治疗反应,这可能是食管癌顺铂耐药的原因之一[4]。因此,抑制EGFR在理论上可恢复食管癌对DDP的敏感性。微小RNA-7(microRNA-7,miRNA-7)miRNA家族成员之一,可直接作用于EGFR 3`-UTR区,抑制EGFR m RNA及其蛋白表达[5]。miRNA-7能否增强食管癌细胞对DDP敏感性尚少相关报道。目的本研究旨在通过转染技术观察miRNA-7过表达对食管癌TE-1细胞DDP敏感性的影响并探究其可能的机制,以期为解决食管癌DDP耐药提供治疗靶点。方法1.用Lipofectmin 2000法向食管癌细胞株TE-1转染组瞬时转miRNA-7 mimic,向转染对照组瞬时转染mimic Negative Control。2.通过Real time-PCR检测以上2组及空白对照组的miRNA-7以及表皮生长因子受体(EGFR)m RNA表达情况。3.Western blot法分别检测转染组与转染对照组总EGFR及细胞浆、细胞核内EGFR蛋白表达。4.CCK-8检测转染组与转染对照组TE-1的顺铂半数抑制浓度(IC50)。5.免疫荧光共聚焦显微镜观察转染组与转染对照组EGFR的表达。结果1.Real Time-PCR结果显示:转染组较转染对照组及空白对照组的miRNA-7表达显著增高,EGFR m RNA表达下降(均P0.001)。2.Western Blot结果显示:转染组较转染对照组总EGFR降低,核内EGFR增高(均P0.01),胞浆EGFR表达降低(P0.05)。3.CCK-8结果示,TE-1中miRNA-7过表达后顺铂(48 h)IC50较转染对照组增高(P0.01)。4.免疫荧光示转染组较转染对照组核内EGFR增高且胞膜与胞浆EGFR表达减少。结论食管癌细胞TE-1顺铂耐药的机制之一是miRNA-7过表达调控EGFR核转位增多。
【关键词】：表皮生长因子受体 微小RNA-7 顺铂耐药 核转位 食管肿瘤
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：
- 摘要5-7
- Abstract7-9
- 前言9-11
- 1 实验材料11-15
- 2 实验方法15-23
- 3 统计学分析23
- 4 结果23-24
- 5 讨论24-25
- 6 小结25-27
- 附图27-30
- 参考文献30-33
- 综述 miRNA-7与肿瘤关系的研究进展33-46
- 参考文献39-46
- 附录46-47
- 外文缩略语表46
- 攻读学位期间发表文章情况46-47
- 致谢47-48
- 个人简历48
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本文编号：311001
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