miR-200c对胃癌细胞的影响及其在耐药性与上皮间质转化（EMT）间的研究
本文关键词：miR-200c对胃癌细胞的影响及其在耐药性与上皮间质转化（EMT）间的研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:通过检测miR-200c在不同分化程度的胃癌细胞系中的表达,探讨miR-200c对胃癌细胞的影响;通过检测相关指标测定胃癌细胞耐药性及其耐药性与上皮间质转化间的关系及miR-200c在两者中的作用。方法:利用RT-qPCR技术分别测定不同分化程度的胃癌细胞中miR-200c的表达水平,初步探讨miR-200c在胃癌细胞中的作用,并根据miR-200c的表达水平筛选出下一步实验的目的胃癌细胞系SGC-7901。我们选取胃癌细胞SGC-7901及其耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR,利用MTT实验检测在不同阿霉素浓度相同时间下针对不同细胞株的细胞抑制率及蛋白免疫印记法检测MRP-1在蛋白水平的表达,随后进行细胞形态观察,划痕实验检测细胞的侵袭能力,RT-qPCR技术检测miR-200c的表达水平及荧光定量PCR技术检测SnailmRNA、Twist1mRNA的表达情况,蛋白免疫印记法检测E-Cadherin在蛋白水平的表达,初步探讨耐药性与上皮间质转化之间的相关性。利用瞬时转染技术将特异性miR-200c mimics和miR-200c inhibitor序列转染至耐阿霉素胃癌细胞株SGC-7901/ADR中,将细胞分为两组,设置实验组为转染miR-200c mimics、miR-200c inhibitor的胃癌细胞株SGC-7901/ADR,Blank组为未转染的胃癌细胞株SGC-7901/ADR。应用RT-qPCR检测miR-200c转染的效率;荧光定量PCR技术检测SnailmRNA、Twist1mRNA的表达情况,蛋白免疫印记法检测各组细胞中E-Cadherin和MRP-1在蛋白水平的表达;MTT法检测各组细胞的抑制率。结果:miR-200c在不同分化程度的胃癌细胞系中的表达水平不同,分化程度越高表达水平越多。针对胃癌细胞系SGC-7901及其耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR,在MTT实验法及蛋白免疫印记法检测MRP-1的表达证实两组细胞具有明显的耐药性的情况下,我们观察到在耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中,细胞形态呈梭型,相比较胃癌细胞SGC-7901,细胞间距较大,排列、聚合松散,形状相对较多样,可见明显伪足,符合EMT的形态学特征;划痕实验中胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR在相同时间及培养条件下,较胃癌细胞SGC-7901具有更强的侵袭能力;蛋白E-Cadherin明显下降,其中EMT特征基因Snail1mRNA、Twist1mRNA明显上升,符合EMT的分子学改变。在胃癌细胞SGC-7901及耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中,miR-200c在胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR的浓度较胃癌细胞SGC-7901较少,约为其0.4倍,具有统计学意义(P㩳0.05)。miR-200c表达水平在瞬时转染Has-miR-200c mimics、Has-mi R-200c inhibitor胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR较分别较未转染组升高约4.7倍、降低约2.5倍,均具有统计学意义(P0.05)。MTT法检测各组细胞抑制率可得,细胞抑制率在转染Has-miR-200c mimics耐药细胞株中为最高,未转染组居中,转染Has-miR-200c inhibitor耐药细胞株为最低。EMT特征基因Snail1mRNA、Twist1mRNA表达水平在转染Has-miR-200c mimics耐药细胞株中明显下降,在转染Has-miR-200c inhibitor耐药细胞株中明显上升。蛋白E-Cadherin在转染Has-miR-200c mimics耐药细胞株中明显上升,而在转染Has-mi R-200c inhibitor耐药细胞株中明显下降;蛋白MRP-1在转染Has-miR-200c mimics耐药细胞株中明显下降,而在转染Has-miR-200c inhibitor耐药细胞株中明显上升。结论:miR-200c在不同分化程度的胃癌细胞中表达水平具有差异性。耐药的胃癌细胞具有上皮间质转化的趋势。miR-200c具有调节胃癌细胞耐药性及发生EMT的作用,且与胃癌耐药性及EMT的发生呈负相关。
【关键词】：miR-200c 胃癌 耐药 上皮间质转化
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：
- 中文摘要3-5
- Abstract5-7
- 英文缩略词7-12
- 前言12-16
- 第一部分 miR-200c在不同胃癌细胞系中表达水平的鉴定16-26
- 1. 目的16
- 2. 实验材料16-18
- 2.1 细胞系16
- 2.2 相关试剂16-17
- 2.3 主要实验仪器及设备17
- 2.4 实验中配制的主要溶液17-18
- 3. 实验方法18-23
- 3.1 细胞复苏18
- 3.2 细胞换液18-19
- 3.3 细胞传代19
- 3.4 细胞冻存19-20
- 3.5 实时定量PCR技术20-22
- 3.6 统计学方法22-23
- 结果23-24
- 讨论24-25
- 小结25-26
- 第二部分 miR-200c和胃癌细胞耐药性与上皮间质转化间的相关关系26-40
- 1. 研究目的26
- 2. 实验材料26-28
- 2.1 细胞系26
- 2.2 相关试剂26-27
- 2.3 主要实验仪器及设备27
- 2.4 实验中配制的主要溶液27-28
- 3. 实验方法28-34
- 3.1 细胞复苏28
- 3.2 细胞换液28
- 3.3 细胞传代28
- 3.4 细胞冻存28
- 3.5 实时定量PCR技术28
- 3.6 细胞计数（血细胞计数板计数法）28-29
- 3.7 药物MTT实验29
- 3.8 细胞划痕实验29-30
- 3.9 蛋白质印迹法（Western blot）30-33
- 3.10统计学方法33-34
- 结果34-38
- 1. MTT法 测试阿霉素对胃癌细胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR细胞增殖的影响34
- 2. RT-qPCR实验法检测miR-200c在胃癌细胞SGC-7901及胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中的表达水平34-35
- 3. 显微镜下胃癌细胞SGC-7901及胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR形态的变化35-36
- 4. 细胞划痕实验检测胃癌细胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素细胞SGC-7901/ADR的侵袭性36
- 5. 荧光定量PCR检 测胃癌细胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中SnailmRNA、Twist1mRNA的表达36-37
- 6. 蛋白免疫印迹法检测胃癌细胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中E-Cadherin、MRP-1 蛋白的表达情况37-38
- 讨论38-39
- 小结39-40
- 第三部分 miR-200c对于胃癌耐药细胞SGC-7901/ADR的影响40-48
- 1. 研究目的40
- 2. 实验材料40-41
- 1.1 细胞系40
- 1.2 主要试剂40-41
- 1.3 主要仪器设备41
- 3. 研究方法41-43
- 3.1 细胞复苏41
- 3.2 细胞换液41
- 3.3 细胞传代41
- 3.4 细胞冻存41
- 3.5 实时定量PCR技术41
- 3.6 细胞计数（血细胞计数板计数法）41
- 3.7 药物MTT实验41
- 3.8 蛋白质印迹法（Western blot）41
- 3.9 细胞瞬时转染技术41-42
- 3.10统计学方法42-43
- 结果43-46
- 1. 人胃癌耐药细胞株SGC-7901/ADR瞬时转染Has-miR-200c mimics、Has-miR-200c inhibitors后，RT-qPCR技术检测胃癌细胞中miR-200c中的表达水平43-44
- 2. MTT法测试阿霉素对转染前后胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR细胞增殖的影响44
- 3. 荧光定量PCR检测转染前后胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中SnailmRNA、Twist1mRNA的表达44-45
- 4. 蛋白免疫印迹法检测胃癌细胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素细胞株SGC-7901/ADR中E-Cadherin、MRP-1 蛋白的表达情况45-46
- 讨论46-47
- 小结47-48
- 结论48-49
- 1 主要结论48
- 2 研究缺陷与展望48-49
- 参考文献49-55
- 在学期间的研究成果55-56
- 致谢56
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本文关键词：miR-200c对胃癌细胞的影响及其在耐药性与上皮间质转化（EMT）间的研究，，由笔耕文化传播整理发布。
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