川陈皮素及蛇床子素抑制黑色素瘤增殖和迁移的机制探究

发布时间：2017-04-20 00:06

  本文关键词：川陈皮素及蛇床子素抑制黑色素瘤增殖和迁移的机制探究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：由于环境污染、紫外线辐射增强,国内外皮肤癌的发病率有逐年增长的趋势。而在所有的皮肤癌症中,黑色素瘤是目前发病最快、死亡率最高的癌症,研究表明已经转移的黑色素瘤五年内治愈率低于17%。目前治疗黑色素瘤最主要的方法还是传统放疗化疗或者最新兴起的肿瘤免疫靶向治疗。放疗和化疗是目前治疗癌症的主要手段,放化疗具有低选择性,毒性较大、同时杀伤肿瘤细胞和身体正常细胞;肿瘤免疫靶向治疗发展时间短,具有针对性小、副作用大、药效持续时间短的缺点。而天然化合物具有纯天然、毒性小、病人心理接受度高等多种优点,因此近年来各实验室将新药开发方向转向了天然化合物,于是在中草药或植物中提取天然化合物来治疗肿瘤或辅助术后康复便变得越来越普遍。实验室经过大量天然化合物的筛选,发现川陈皮素和蛇床子素这两种天然植物化合物具有抑制黑色素瘤增殖和迁移的作用,而川陈皮素和蛇床子素在抗黑色素瘤增殖及迁移的分子机制方面还未见相关文献报道。本论文分为三个部分,第一部分介绍黑色素瘤、黑色素瘤的发生机制及其治疗方法；第二部分在细胞水平证明川陈皮素和蛇床子素抑制黑色素瘤细胞增殖和迁移;体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10和人黑色素瘤细胞A375上,利用MTS法和克隆形成法证明川陈皮素和蛇床子素具有明显抑制细胞增殖的效果；用细胞划线实验和transwell实验证明川陈皮素和床子素能明显抑制黑色素瘤细胞的迁移作用;在抑制黑色素瘤迁移的分子机制上,川陈皮素和床子素都可以通过影响Wnt信号通路调节下游信号因子,川陈皮素通过调节Wnt信号通路下游snai1、twist,进而影响N-cadherin、 E-cadherin的表达来减缓细胞的迁移;蛇床子素通过Wnt信号通路调节下游slug,进而通过影响N-cadherin、E-cadherin的表达来减缓细胞的迁移。在抑制黑色素瘤增殖的分子机制上,川陈皮素和蛇床子素都是通过Wnt信号通路影响下游cyclinD1调控细胞周期,进而影响细胞周期来抑制黑色素瘤细胞的增殖。第三部分在动物水平证明川陈皮素和蛇床子素抑制黑色素瘤生长和肺转移;实验结果表明,通过皮下荷瘤实验发现川陈皮素和蛇床子素对黑色素瘤的生长有显著的抑制作用,与正常组比较差异显著。通过尾静脉注射黑色素瘤建立肺转移模型,实验结果表明川陈皮素和蛇床子素均能明显减少黑色素瘤在肺部的转移,肺部的肿瘤数量与对照组相比明显减少,说明药物对黑色素瘤迁移确实有明显的抑制作用。本论文在动物水平、细胞水平和分子水平系统研究了川陈皮素和蛇床子素抗黑色素瘤生长增殖和迁移的作用效果及相关分子机制,研究结果表明川陈皮素和蛇床子素是通过抑制周期蛋白cyclinDl表达从而抑制黑色素瘤细胞的生长增殖,同时还通过提高E-cadherin表达和降低N-cadherin表达从而具有抑制黑色素瘤细胞的迁移作用。本研究为今后进一步深入探讨川陈皮素和蛇床子素的抗黑色素瘤临床应用提供了一些前期实验结果和研究思路。
【关键词】：黑色素瘤 川陈皮素 蛇床子素 Wnt信号通路 肿瘤迁移
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 论文摘要6-8
• Abstract8-13
• 第一章：黑色素瘤及抗黑色素瘤药物简述13-20
• 1. 癌症及黑色素瘤13
• 2. 黑色素瘤的诱发因素13-14
• 3. 黑色素瘤的形成过程及信号通路14-17
• 4. 现阶段黑色素瘤现阶段治疗方法17-20
• 第二章：川陈皮素、蛇床子素抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移20-63
• 1. 引言20-22
• 2. 材料与试剂22-23
• 3. 实验方法23-26
• 4. 实验结果及分析26-59
• 4.1 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移26-43
• 4.1.1 川陈皮素药物浓度选择26-28
• 4.1.2 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的增殖28-30
• 4.1.2.1 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的增殖-MTS法28-29
• 4.1.2.2 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的增殖-克隆形成法29-30
• 4.1.3 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的迁移30-36
• 4.1.3.1 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的水平迁移-划线实验30-35
• 4.1.3.2 川陈皮素抑制黑色素瘤细胞的垂直迁移-transwell实验35-36
• 4.1.4 川陈皮素通过抑制黑色素瘤细胞增殖和迁移的信号通路36-43
• 4.1.4.1 川陈皮素通过抑制N-cadherin、促进E-cadherin来抑制黑色素瘤细胞的迁移36-38
• 4.1.4.2 川陈皮素通过snail、twist抑制N-cadherin、促进E-cadherin的表达38-40
• 4.1.4.3 川陈皮素通过wnt信号通路,影响黑色素瘤细胞的迁移和增殖40-43
• 4.2 蛇床子素抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移43-59
• 4.2.1 蛇床子素药物浓度选择43-44
• 4.2.2 蛇床子素抑制黑色素瘤细胞的增殖44-47
• 4.2.2.1 蛇床子素抑制黑色素瘤细胞的增殖-MTS法44-45
• 4.2.2.2 蛇床子素抑制黑色素瘤细胞的增殖-克隆形成法45-47
• 4.2.3 蛇床子素抑制黑色素瘤细胞的迁移47-52
• 4.2.4 蛇床子素通过抑制黑色素瘤细胞增殖和迁移的信号通路52-59
• 4.2.4.1 蛇床子素通过抑制N-cadherin、促进E-cadherin来抑制黑色素瘤细胞的迁移52-54
• 4.2.4.2 蛇床子素通过slug抑制N-cadherin、促进E-cadherin的表达54-56
• 4.2.4.3 蛇床子素通过wnt信号通路,影响黑色素瘤细胞的迁移和增殖56-59
• 5. 讨论59-63
• 第三章：川陈皮素、蛇床子素抑制小鼠黑色素瘤的生长和肺转移63-76
• 1. 引言63
• 2. 材料与试剂63-64
• 3. 实验方法64
• 4. 实验结果及分析64-75
• 4.1 川陈皮素抑制小鼠黑色素瘤的生长和肺转移64-70
• 4.1.1 川陈皮素抑制小鼠黑色素瘤的生长64-67
• 4.1.2 川陈皮素抑制小鼠黑色素瘤的肺转移67-68
• 4.1.3 川陈皮素抑制小鼠黑色素瘤生长和迁移的分子机制68-70
• 4.2 蛇床子素抑制小鼠黑色素瘤的生长和肺转移70-75
• 4.2.1 蛇床子素抑制小鼠黑色素瘤的生长70-72
• 4.2.2 蛇床子素抑制小鼠黑色素瘤的肺转移72-73
• 4.2.3 蛇床子素抑制小鼠黑色素瘤生长和迁移的分子机制73-75
• 5. 讨论75-76
• 全文总结76-78
• 参考文献78-82
• 致谢82

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本文编号：317441