microRNAs调控口腔鳞癌增殖及凋亡的实验研究
发布时间：2021-07-09 05:04
研究背景和目的:从全球范围看,相对于全身其他部位的恶性肿瘤来说,头颈部鳞癌恶性肿瘤的发生率较高,位列第6,每年有大约50万的新发病例,并且造成20万人的死亡。据统计,头颈部恶性肿瘤的发病率为20.6/10万[1],其中以口腔癌发病率最高,最常见病理类型为鳞状细胞癌,占比约90%[15]。micro RNAs（mi RNAs）是19-23个碱基大小的RNA序列,广泛存在于动植物、甚至细菌中,虽然不编码蛋白质,却能对细胞的生理及病理过程能起到重要的作用。肿瘤的发生是基因突变的结果,其的形成及发展过程中伴随着多种mi RNAs的异常表达,这种异常表达随着肿瘤部位及组织及病理特征的不同而变化。为了更深入的认识mi RNAs在口腔鳞状细胞癌中所发挥的作用,本研究对影响调控口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的mi RNAs进行了筛选、鉴定并进一步实验验证其具体作用机制。方法:我们对选取的8对口腔鳞癌及其癌旁正常组织进行mi RNA芯片分析筛选口腔鳞癌组织中差异化表达的mi RNAs;在临床样本及口腔鳞癌细胞系中利用real-time PCR的方法进行差异性验证,通过体外细胞实验的方法对筛选出的差异化mi RN...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA芯片数据
生物信息学的方法进行 microRNA 的靶基因预测icroRNA 靶基因预测网站：Targetscan(http://www.targetscan.org/)miRBase(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)PicTar(http://pictar.bio.nyn.edu/)MicroCosmTargets(http://www.ebi.ac.uk/)miR-330-3p 靶基因预测研究通过 microRNA 芯片筛选出在口腔鳞癌中高表达的 miR-33鳞癌大样本以及细胞系中得到验证，进一步利用生物信息学网站靶基因，并与芯片数据口腔鳞癌细胞中表达下调的基因进行去交分别是 CNTFR. PDCD4. YOD1. RECK. GALNT12. BTG2. C7。
材料和方法1.8 PDCD4 3’UTR 双荧光素酶表达载体的构建以及扩增将 PDCD4 的 3’UTR 中可能含有 miR-330-3p 结合位点的片段克隆、扩增，并插入到 pGL3 质粒载体的相应位点构建质粒 pGL3-miR-330-3p-PDCD4（拓然生物，上海），之后转染报告基因载体及模拟物至 293T 细胞，同时以 pRL-TK 载体作内参，空白 pGL3 作为对照测定相对荧光素酶活性。如图 1.1，SV40 为启动子，酶切位点为 Xbal。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA在去甲斑蝥素致K562细胞凋亡中的作用研究[J]. 张帅,李有杰,张超,岳真,张文娟,刘在贵,谢书阳. 中国病理生理杂志. 2011(03)
[2]转录因子与microRNA在基因表达调控中的功能联系及差异[J]. 闫晓红,王宁. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(10)
[3]H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制[J]. 李朝晖,李天题,王芬,刘松,刘艳艳,刘祥玉,庄绪莹. 中山大学学报(医学科学版). 2009(S4)
[4]舌鳞癌组织microRNA表达谱的检测和分析[J]. 李劲松,黄洪章,宋尔卫,潘朝斌,陈伟良,武东辉,林钊宇. 中华口腔医学研究杂志(电子版). 2008(06)
[5]微小RNA对肿瘤影响的研究进展[J]. 孙铁为,王瑾,吴德全,孙世波. 中华实验外科杂志. 2007(12)
本文编号：3273085
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA芯片数据
生物信息学的方法进行 microRNA 的靶基因预测icroRNA 靶基因预测网站：Targetscan(http://www.targetscan.org/)miRBase(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)PicTar(http://pictar.bio.nyn.edu/)MicroCosmTargets(http://www.ebi.ac.uk/)miR-330-3p 靶基因预测研究通过 microRNA 芯片筛选出在口腔鳞癌中高表达的 miR-33鳞癌大样本以及细胞系中得到验证，进一步利用生物信息学网站靶基因，并与芯片数据口腔鳞癌细胞中表达下调的基因进行去交分别是 CNTFR. PDCD4. YOD1. RECK. GALNT12. BTG2. C7。
材料和方法1.8 PDCD4 3’UTR 双荧光素酶表达载体的构建以及扩增将 PDCD4 的 3’UTR 中可能含有 miR-330-3p 结合位点的片段克隆、扩增，并插入到 pGL3 质粒载体的相应位点构建质粒 pGL3-miR-330-3p-PDCD4（拓然生物，上海），之后转染报告基因载体及模拟物至 293T 细胞，同时以 pRL-TK 载体作内参，空白 pGL3 作为对照测定相对荧光素酶活性。如图 1.1，SV40 为启动子，酶切位点为 Xbal。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA在去甲斑蝥素致K562细胞凋亡中的作用研究[J]. 张帅,李有杰,张超,岳真,张文娟,刘在贵,谢书阳. 中国病理生理杂志. 2011(03)
[2]转录因子与microRNA在基因表达调控中的功能联系及差异[J]. 闫晓红,王宁. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(10)
[3]H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制[J]. 李朝晖,李天题,王芬,刘松,刘艳艳,刘祥玉,庄绪莹. 中山大学学报(医学科学版). 2009(S4)
[4]舌鳞癌组织microRNA表达谱的检测和分析[J]. 李劲松,黄洪章,宋尔卫,潘朝斌,陈伟良,武东辉,林钊宇. 中华口腔医学研究杂志(电子版). 2008(06)
[5]微小RNA对肿瘤影响的研究进展[J]. 孙铁为,王瑾,吴德全,孙世波. 中华实验外科杂志. 2007(12)
本文编号：3273085
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