ER-α36不同表达水平及阿霉素耐药对三阴性乳腺癌细胞miRNAs表达的影响研究
发布时间：2021-09-01 15:15
目的:探讨ER-α36不同表达水平对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株miRNAs表达谱的影响以及阿霉素耐药的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株miRNAs表达谱的变化。通过筛选出差异表达的miRNAs并分析其调控的靶基因与信号通路,为进一步揭示乳腺癌细胞ER-α36表达对三阴性乳腺癌生物学行为影响可能的分子调控机制及阿霉素耐药机制提供更多的实验依据,同时也为高表达ER-α36乳腺癌患者的分子诊断、临床分型、预后判断、耐药监测等提供新的候选检测指标和临床检测新途径。方法:1.采用慢病毒转染法将负载ER-α36特异性短发夹RNA的重组慢病毒转染至三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过嘌呤霉素筛选,以构建ER-α36基因沉默的稳定转染细胞株,并采用该细胞株建立裸鼠移植瘤模型。同时采用阿霉素耐药的三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231/ADR建立相应裸鼠移植瘤模型。2.分别采用qRT-PCR法和Western blot法检测ER-α36沉默后及阿霉素耐药的MDA-MB-231细胞株和移植瘤的ER-α36 m RNA及ER-α36蛋白的表达变化。3.分别设置慢病毒感染ER-α36...
【文章来源】：成都中医药大学四川省
【文章页数】：106 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌细胞中的相对表达量注：A.qRT-PCR检测ER-α36mRNA表达；B.Westernblot检测ER-α36蛋白表达
27MCF-10A和MCF-7细胞中ER-α36表达水平，差异有统计学意义（均P0.05），见图1A和图1B。AB图1ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌细胞中的相对表达量注：A.qRT-PCR检测ER-α36mRNA表达；B.Westernblot检测ER-α36蛋白表达。*表示P0.05，**表示P<0.0013.2荧光显微镜观察转染效率通过荧光显微镜观察，转染72h时荧光表达丰度较高，转染效率超过90%，且MDA-MB-231细胞形态正常生长良好，见图2。空白对照组阴性对照组沉默实验组图2感染72h时，荧光显微镜下观察细胞（200×）3.3转染后MDA-MB-231细胞ER-α36mRNA和蛋白表达根据2-ΔΔCt值作图，ER-α36mRNA表达结果见图3A。与空白对照组相比，
28阴性对照组ER-α36mRNA的表达变化不明显，差异无统计学意义（P0.05）；沉默实验1、2、3组ER-α36mRNA表达均被明显抑制，差异有统计学意义（均P0.001），其中沉默实验1组的干扰效果最佳，选用该组shRNA-V1序列进行后续实验。根据WB条带图及灰度值计算，ER-α36蛋白表达结果见图3B。与空白对照组相比，阴性对照组ER-α36蛋白表达几乎无变化，差异无统计学意义（P0.05）；沉默实验1、2、3组ER-α36蛋白表达均受到不同程度的抑制，差异有统计学意义（均P0.05），与qRT-PCR结果一致。AB图3转染后细胞ER-α36mRNA和蛋白相对表达量注：A.qRT-PCR检测ER-α36mRNA表达；B.Westernblot检测ER-α36蛋白表达。control为空白对照组，shRNA-NC为阴性对照组，shRNA-V1、V2、V3分别为沉默实验1、2、3组。*表示P0.05，**表示P<0.0013.4转染后裸鼠移植瘤体积变化各组裸鼠均出现移植瘤，肿瘤体积变化见图4。与空白对照组相比，阴性对照组肿瘤体积变化趋势一致，差异无统计学意义（P>0.05）；沉默实验组肿瘤体积较小且增长速度减慢，肿瘤生长被抑制，差异有统计学意义（P0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-146a在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响[J]. 张艳平,李雪兰,丁矢,陈兴凤. 医学分子生物学杂志. 2019 (01)
[2]食管鳞癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药机制探讨[J]. 惠怡然,杨珍珍,李岳衡,高盼,许培荣,范天黎. 郑州大学学报(医学版). 2018(05)
[3]人喉癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及其生物学特性[J]. 陈婕,王家东. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(02)
[4]胃癌中雌激素受体-α36与α66 mRNA的表达及其临床病理意义[J]. 王陆佰,邓昊,黄萱,陈莹,刘丽江. 武汉大学学报(医学版). 2010(01)
[5]Identification of squamous cell carcinoma associated proteins by proteomics and loss of beta tropomyosin expression in esophageal cancer[J]. Ferdous Rastgar Jazii,Zahra Najafi,Reza Malekzadeh,Thomas P Conrads,Abed Ali Ziaee,Christian Abnet,Mansour Yazdznbod,Ali Asghar Karkhane,Ghasem H Salekdeh. World Journal of Gastroenterology. 2006(44)
[6]乳腺癌耐药细胞ER表达状态影响细胞对屈洛昔芬和阿霉素的敏感性[J]. 高海东,孙靖中,毕冬松,马榕. 癌症. 2003(04)
本文编号：3377207
【文章来源】：成都中医药大学四川省
【文章页数】：106 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌细胞中的相对表达量注：A.qRT-PCR检测ER-α36mRNA表达；B.Westernblot检测ER-α36蛋白表达
27MCF-10A和MCF-7细胞中ER-α36表达水平，差异有统计学意义（均P0.05），见图1A和图1B。AB图1ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌细胞中的相对表达量注：A.qRT-PCR检测ER-α36mRNA表达；B.Westernblot检测ER-α36蛋白表达。*表示P0.05，**表示P<0.0013.2荧光显微镜观察转染效率通过荧光显微镜观察，转染72h时荧光表达丰度较高，转染效率超过90%，且MDA-MB-231细胞形态正常生长良好，见图2。空白对照组阴性对照组沉默实验组图2感染72h时，荧光显微镜下观察细胞（200×）3.3转染后MDA-MB-231细胞ER-α36mRNA和蛋白表达根据2-ΔΔCt值作图，ER-α36mRNA表达结果见图3A。与空白对照组相比，
28阴性对照组ER-α36mRNA的表达变化不明显，差异无统计学意义（P0.05）；沉默实验1、2、3组ER-α36mRNA表达均被明显抑制，差异有统计学意义（均P0.001），其中沉默实验1组的干扰效果最佳，选用该组shRNA-V1序列进行后续实验。根据WB条带图及灰度值计算，ER-α36蛋白表达结果见图3B。与空白对照组相比，阴性对照组ER-α36蛋白表达几乎无变化，差异无统计学意义（P0.05）；沉默实验1、2、3组ER-α36蛋白表达均受到不同程度的抑制，差异有统计学意义（均P0.05），与qRT-PCR结果一致。AB图3转染后细胞ER-α36mRNA和蛋白相对表达量注：A.qRT-PCR检测ER-α36mRNA表达；B.Westernblot检测ER-α36蛋白表达。control为空白对照组，shRNA-NC为阴性对照组，shRNA-V1、V2、V3分别为沉默实验1、2、3组。*表示P0.05，**表示P<0.0013.4转染后裸鼠移植瘤体积变化各组裸鼠均出现移植瘤，肿瘤体积变化见图4。与空白对照组相比，阴性对照组肿瘤体积变化趋势一致，差异无统计学意义（P>0.05）；沉默实验组肿瘤体积较小且增长速度减慢，肿瘤生长被抑制，差异有统计学意义（P0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-146a在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响[J]. 张艳平,李雪兰,丁矢,陈兴凤. 医学分子生物学杂志. 2019 (01)
[2]食管鳞癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药机制探讨[J]. 惠怡然,杨珍珍,李岳衡,高盼,许培荣,范天黎. 郑州大学学报(医学版). 2018(05)
[3]人喉癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及其生物学特性[J]. 陈婕,王家东. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(02)
[4]胃癌中雌激素受体-α36与α66 mRNA的表达及其临床病理意义[J]. 王陆佰,邓昊,黄萱,陈莹,刘丽江. 武汉大学学报(医学版). 2010(01)
[5]Identification of squamous cell carcinoma associated proteins by proteomics and loss of beta tropomyosin expression in esophageal cancer[J]. Ferdous Rastgar Jazii,Zahra Najafi,Reza Malekzadeh,Thomas P Conrads,Abed Ali Ziaee,Christian Abnet,Mansour Yazdznbod,Ali Asghar Karkhane,Ghasem H Salekdeh. World Journal of Gastroenterology. 2006(44)
[6]乳腺癌耐药细胞ER表达状态影响细胞对屈洛昔芬和阿霉素的敏感性[J]. 高海东,孙靖中,毕冬松,马榕. 癌症. 2003(04)
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