Id1/Id3对结肠癌细胞“干性”的影响及机制探讨
发布时间：2021-11-12 16:58
目的观察分化抑制因子Id1/Id3对结肠癌细胞“干性”的影响,探讨对肠癌干细胞重要的信号通路Wnt和SHH通路的影响机制。方法应用慢病毒感染系统构建Id1/Id3敲减的肠癌HCT116细胞株和Id1/Id3过表达的正常肠上皮细胞株NCM460,以及HCT116Sh-Id1、HCT116Sh-Id3细胞中过表达c-Myc的细胞株。应用实时无标记细胞检测技术（RTCA）、克隆形成实验、流式细胞周期分析检测细胞增殖水平;Western blot检测相关分子的蛋白表达情况;体外无血清悬浮培养方法检测细胞的成球能力;显微镜下观察细胞形态,分析EMT改变;分别用Wnt通路的抑制剂FH535和SHH通路的抑制剂HPI-1处理肠癌HCT116细胞48h,然后Western blot检测相关分子蛋白表达水平。结果1.HCT116细胞中的Id1/Id3基因沉默后其增殖活性及克隆形成能力明显下降（p<0.05）,且增殖相关分子PCNA、Survivin及周期相关蛋白cyclinD1、cyclinE蛋白水平也明显下调;PI3K/AKT通路中p-PI3K、p-AKT的表达下调。相反过表达Id1/Id3基因...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HCT116细胞和NCM460细胞中Id1/Id3的表达A：qPCR检测NCM460及HCT116细胞中Id1、Id3的mRNA水平；B：westernblot
18图 1.2 慢病毒感染靶细胞效率A：荧光显微镜下观察 HCT116 细胞和 NCM460 细胞的转染效率（10western blot 检测对照组与实验组 HCT116 细胞、NCM460 细胞中 Id1/I达；
3. 敲减 Id1/Id3 的 HCT116 细胞和过表达 Id1/Id3 NCM460 细胞的生长曲线的比较经慢病毒感染获得稳定敲减 Id1/Id3 的 HCT116 细胞和过表达 Id1/Id3 的NCM460 细胞，将其用胰酶消化并用培养液调整细胞浓度至 1×105cells/ml 后，使用 RTCA 实时细胞分析仪检测细胞增殖能力，取 4 个时间点绘制细胞生长曲线。结果显示，在 48h 后，敲减 Id1/Id3 组与 HCT116-con 组相比细胞的生长受到了抑制（P＜0.05）（图 1.3A 和 B 所示），过表达 Id1/Id3 组与 NCM460con 组比细胞的生长受到了促进。说明在肠癌细胞 HCT116 株敲减 Id1/Id3 可以抑制细胞的增殖。A B
本文编号：3491328
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HCT116细胞和NCM460细胞中Id1/Id3的表达A：qPCR检测NCM460及HCT116细胞中Id1、Id3的mRNA水平；B：westernblot
18图 1.2 慢病毒感染靶细胞效率A：荧光显微镜下观察 HCT116 细胞和 NCM460 细胞的转染效率（10western blot 检测对照组与实验组 HCT116 细胞、NCM460 细胞中 Id1/I达；
3. 敲减 Id1/Id3 的 HCT116 细胞和过表达 Id1/Id3 NCM460 细胞的生长曲线的比较经慢病毒感染获得稳定敲减 Id1/Id3 的 HCT116 细胞和过表达 Id1/Id3 的NCM460 细胞，将其用胰酶消化并用培养液调整细胞浓度至 1×105cells/ml 后，使用 RTCA 实时细胞分析仪检测细胞增殖能力，取 4 个时间点绘制细胞生长曲线。结果显示，在 48h 后，敲减 Id1/Id3 组与 HCT116-con 组相比细胞的生长受到了抑制（P＜0.05）（图 1.3A 和 B 所示），过表达 Id1/Id3 组与 NCM460con 组比细胞的生长受到了促进。说明在肠癌细胞 HCT116 株敲减 Id1/Id3 可以抑制细胞的增殖。A B
本文编号：3491328
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3491328.html
