microRNA-10a诱导肿瘤相关成纤维细胞抑制结肠癌肝转移的机制
发布时间：2021-11-28 21:08
目的探讨miR-10a对结肠癌肝转移微环境中肝成纤维细胞的影响及分子机制,揭示miR-10a诱导的肝成纤维细胞功能改变对结肠癌细胞在肝形成转移灶的影响,为结肠癌肝转移的分子机制提供新的理论基础。方法1用TGF-β1处理肝星状细胞系LX-2（命名为TGF-LX-2细胞）48 h,通过实时荧光定量聚合酶链反应（Quantitative real time fluorescene polymerase chain reaction,qRT-PCR）实验检测LX-2细胞和TGF-LX-2细胞中α-SMA和miR-10a的表达差异;TGF-LX-2细胞中过表达miR-10a,采用CCK-8实验、Transwell实验和酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测各组细胞的增殖、迁移能力和促炎因子IL-6和IL-8的分泌水平。2收集过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞和其对照组条件培养基作用于结肠癌细胞系SW480,通过CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、细胞-基质粘附实验和成球实验检测两组细胞的条件培养基对SW480细...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR实验检测TGF-β1处理LX-2细胞48小时后α-SMA的表达（n=3,x±s）
-19-通过CCK-8实验分析转染miR-10amimics和miR-10aNC对TGF-LX-2细胞增殖能力的影响。转染24h后，将细胞从新接种至96孔板，检测第1-4d的细胞活性。结果显示，miR-10amimics组细胞在第2、3、4d的增殖能力显著低于同时期的miR-10aNC组细胞（t=3.323,P=0.029;t=3.711,P=0.021;t=6.498,P=0.003；图4）。以上结果表明过表达miR-10a可抑制TGF-LX-2细胞的增殖。注：*：P<0.05,**：P<0.01，与对照组比较图4CCK-8实验检测过表达miR-10a对TGF-LX-2细胞增殖能力的影响（n=3,x±s）通过Transwell（无基质胶）分析转染miR-10amimics和miR-10aNC对TGF-LX-2细胞迁移能力的影响。转染24h后，将细胞接种于Transwell小室，24h后观察细胞迁移情况。结果显示，miR-10amimics组细胞穿过基底膜（无基质胶）的细胞数（42±2.03）显著低于同时期的miR-10aNC组细胞（72±3.28）（t=7.861,P=0.001,图5）。以上结果表明过表达miR-10a可抑制TGF-LX-2细胞的迁移。注：左图为代表性实验结果；右图为每视野细胞计数结果的平均值，**：P<0.01，与对照组比较图5Transwell实验（无基质胶）检测过表达miR-10a对TGF-LX-2细胞迁移能力的影响（n=3,x±s）
-21-CM）对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响。用50%TGF-LX-2-10a/NCCM+50%MEM-α重悬SW480细胞，随后将其接种至96孔板，检测第1~4d的细胞活性。结果显示，TGF-LX-2-10a/NCCM处理后SW480细胞的增殖能力无显著性差异（P>0.05,图7）。以上结果表明过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞的培养基对SW480细胞的增殖能力无影响。注：条件培养基（conditionedmedium,CM）图7CCK-8实验检测TGF-LX-2-10aCM对SW480细胞增殖能力的影响（n=3,x±s）2）TGF-LX-2-10a的培养基抑制SW480细胞的迁移和侵袭能力通过划痕实验分析TGF-LX-2-10aCM对SW480细胞迁移能力的影响。50%TGF-LX-2-10a/NCCM+50%MEM-α处理SW480细胞24h后，用200μL的枪头在孔内制造划痕，随后将培养基更换成无血清MEM-α培养基继续培养，显微镜下观察拍照，记录0h、24h和48h在同一位置的细胞划痕情况。结果显示，TGF-LX-2-10aCM处理的SW480细胞在第24h和48h的迁移能力显著低于同时期的TGF-LX-2-NCCM处理的细胞（t=5.645,P=0.005;t=5.866,P=0.004；图8）。以上结果表明过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞的培养基可抑制SW480细胞的迁移。
本文编号：3525143
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR实验检测TGF-β1处理LX-2细胞48小时后α-SMA的表达（n=3,x±s）
-19-通过CCK-8实验分析转染miR-10amimics和miR-10aNC对TGF-LX-2细胞增殖能力的影响。转染24h后，将细胞从新接种至96孔板，检测第1-4d的细胞活性。结果显示，miR-10amimics组细胞在第2、3、4d的增殖能力显著低于同时期的miR-10aNC组细胞（t=3.323,P=0.029;t=3.711,P=0.021;t=6.498,P=0.003；图4）。以上结果表明过表达miR-10a可抑制TGF-LX-2细胞的增殖。注：*：P<0.05,**：P<0.01，与对照组比较图4CCK-8实验检测过表达miR-10a对TGF-LX-2细胞增殖能力的影响（n=3,x±s）通过Transwell（无基质胶）分析转染miR-10amimics和miR-10aNC对TGF-LX-2细胞迁移能力的影响。转染24h后，将细胞接种于Transwell小室，24h后观察细胞迁移情况。结果显示，miR-10amimics组细胞穿过基底膜（无基质胶）的细胞数（42±2.03）显著低于同时期的miR-10aNC组细胞（72±3.28）（t=7.861,P=0.001,图5）。以上结果表明过表达miR-10a可抑制TGF-LX-2细胞的迁移。注：左图为代表性实验结果；右图为每视野细胞计数结果的平均值，**：P<0.01，与对照组比较图5Transwell实验（无基质胶）检测过表达miR-10a对TGF-LX-2细胞迁移能力的影响（n=3,x±s）
-21-CM）对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响。用50%TGF-LX-2-10a/NCCM+50%MEM-α重悬SW480细胞，随后将其接种至96孔板，检测第1~4d的细胞活性。结果显示，TGF-LX-2-10a/NCCM处理后SW480细胞的增殖能力无显著性差异（P>0.05,图7）。以上结果表明过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞的培养基对SW480细胞的增殖能力无影响。注：条件培养基（conditionedmedium,CM）图7CCK-8实验检测TGF-LX-2-10aCM对SW480细胞增殖能力的影响（n=3,x±s）2）TGF-LX-2-10a的培养基抑制SW480细胞的迁移和侵袭能力通过划痕实验分析TGF-LX-2-10aCM对SW480细胞迁移能力的影响。50%TGF-LX-2-10a/NCCM+50%MEM-α处理SW480细胞24h后，用200μL的枪头在孔内制造划痕，随后将培养基更换成无血清MEM-α培养基继续培养，显微镜下观察拍照，记录0h、24h和48h在同一位置的细胞划痕情况。结果显示，TGF-LX-2-10aCM处理的SW480细胞在第24h和48h的迁移能力显著低于同时期的TGF-LX-2-NCCM处理的细胞（t=5.645,P=0.005;t=5.866,P=0.004；图8）。以上结果表明过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞的培养基可抑制SW480细胞的迁移。
本文编号：3525143
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