肝癌肿瘤相关成纤维细胞促进肝癌转移的机制

发布时间：2021-12-28 19:40

　　目的:肝细胞肝癌（Hepatocellular Carcinoma）是一种高死亡率的原发性肿瘤。其恶性程度和致死率居高不下,每年大约有25¹00万肝癌患者死亡,其预后不良的主要原因主要是肝癌的复发和转移。肝癌肿瘤相关成纤维细胞是肝癌肿瘤微环境的重要成分之一,与肝癌的侵袭和转移密切相关。因此,本研究的目的是探究肝癌肿瘤相关成纤维细胞通过哪些调控机制来促进肝癌侵袭转移。方法:1、收集肝细胞肝癌组织样本和癌旁组织样本提取成纤维细胞,分离并鉴定提取的两种成纤维细胞。分析CAF和PTF间质细胞标志物α-SMA和Vimentin的表达趋势,比较CAF和PTF自身的迁移能力和增殖活性。2、采用NOD/SCID鼠建立皮下瘤模型,初步验证CAF和PTF对肝癌细胞皮下成瘤和肺转移能力的作用,并对预后进行分析。采用Transwell小室迁移、侵袭实验、划痕实验、蛋白印迹实验从体外比较CAF和PTF对肝癌细胞迁移和侵袭、上皮间质转化的作用。3、蛋白芯片检测CAF和PTF分泌蛋白的差异并用Elisa验证蛋白芯片结果。对肝癌组织样本进行实时定量PCR实验分析蛋白芯片筛出的分泌因子与ACTA2... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

肝癌病人肿瘤组织和癌旁组织HE染色图1：肝癌病人肿瘤组织和癌旁组织HE染色结果发现，间质细胞在肿瘤组织中

图 2 肝癌病人肿瘤组织和癌旁组织 α-SMA 免疫组织化学染色图 2：α-SMA 蛋白在肝癌病人肿瘤组织的表达高于癌旁组织。1.2.3 肝癌组织中肿瘤相关成纤维细胞的分离、培养和成骨成脂诱导我们收集了 50 例肝癌患者的新鲜肿瘤组织和相应癌旁组织标本，IV 型胶原酶消化后无菌培养，分离出 CAF 和 PTF 原代细胞，传代培养并观察。收集的 50例标本中有 22 例标本分离得到 CAF 和 PTF，其中 6 例 CAF 和 PTF 能够稳定传代。图 3 选取的患者为中低分化肝细胞肝癌，临床病理分级 3 级，TNM 分期 II期，分离培养的 CAF 和 PTF 排列成放射状或漩涡状，呈梭形或纺锤状生长。我们将分离培养得到的 CAF 和 PTF 用成脂诱导培养基连续培养两周，每隔三天更换新鲜成脂诱导培养基。随着诱导培养时间的延长，CAF 和 PTF 形态逐渐变为圆形，胞浆内可见小脂滴形成。两周后油红 O 染色，倒置相差显微镜明场观察，诱导后的 CAF 和 PTF 胞浆内可见大量红色脂滴（图 3）。我们将分离培养得到的CAF 和 PTF 用成骨诱导培养基连续培养三周，每隔三天更换新鲜成骨诱导培养基。随着诱导培养时间的延长，CAF 和 PTF 增殖能力减弱，细胞形态日趋不规

CAF和PTF正常培养形态和体外成脂、成骨诱导分化;

【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of cancer-associated fibroblasts in invasion and metastasis of gastric cancer[J]. Yu Yan,Li-Feng Wang,Rui-Fen Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(33)



本文编号：3554615