FASN基因的原核表达及生物信息学分析

发布时间：2022-01-03 03:56

　　脂肪酸合成酶（FASN）在生物体内起着重要的作用,主要参与恶性肿瘤的数量调控。本研究旨在构建pET28a-FASN原核表达载体,并表达重组His-FASN蛋白,对该基因进行结构与功能的生物信息学分析。设计FASN基因特异性引物,通过PCR扩增获得的目的基因与原核表达载体pET28a连接,经IPTG诱导表达His-FASN蛋白。获得基因片段大小为1 320 bp,编码440个氨基酸;成功构建至pET28a原核表达载体,通过优化表达,确定在温度为35℃、IPTG浓度0.5 mmol/L、诱导时间为6 h的条件下融合蛋白表达量较高,获得蛋白大小约为53 kD;生物信息学分析结果表明FASN基因编码的蛋白是一个不稳定且具有亲水性的蛋白,不存在信号肽及跨膜区,可成为蛋白激酶磷酸化位点有12个Ser、5个Thr、3个Tyr。此外,从蛋白相互作用网络中发现,相互作用的蛋白包括主要酰基辅酶A合成酶长链家族成员及乙酰辅酶A羧化酶家族成员,为开发抑制剂药物提供了理论依据。 

【文章来源】：基因组学与应用生物学. 2020,39(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

FASN基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳

重组质粒pET28a-FASN的菌液PCR及双酶切鉴定

利用ExPASy网站中的ProtParam工具对人类FASN基因编码的氨基酸序列进行分析显示：FASN所编码的蛋白质由522个氨基酸组成，其中亮氨酸含量最高达13.0%，比其它氨基酸的含量大很多。FASN编码蛋白质分子量大小为57.466 13 kD，分子式为C2515H3999N725O773S22，等电点理论值为6.08，原子总数8 034，不稳定系数为41.70，说明FASN基因编码的蛋白是一个不稳定蛋白；总平均亲水性为-0.216，说明FASN基因编码的蛋白是一个亲水蛋白。图4 融合蛋白His-FASN的不同时间的诱导表达

【参考文献】：
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本文编号：3565519