透明细胞肾癌裸鼠模型构建及靶向药物的敏感性研究
发布时间：2022-01-07 09:19
研究背景:肾癌是一种常见的泌尿系统肿瘤,其最为主要的病理类型是肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）,占到肾癌患者总数的90%以上。RCC可进一步细分,其中透明细胞肾癌（Clear renal cell carcinoma,ccRCC）是RCC的主要病理类型,约占RCC发病总数的85%以上。目前,外科手术切除仍然是单一病灶等原发性肾癌的首选方案,但对于转移、扩散、复发的肾癌,以及身体条件不能耐受外科手术治疗的患者,靶向治疗是其主要治疗策略。目前,包括索拉非尼（Sorafenib）、舒尼替尼（Sunitinib）等在内的分子靶向药物已在肾癌临床诊疗中得到了广泛应用,为患者带来福音。尽管如此,肾癌分子靶向治疗仍存在诸多问题:（1）肾癌分子靶向治疗存在不同患者间的个体差异,目前尚无分子靶向药物治疗肾癌患者预后的明确的指示分子;（2）肾癌分子靶向治疗存在有药物耐受（Drug-resistance）的现象;（3）分子靶向治疗费用昂贵。如有可靠方法对患者接受分子靶向治疗的效果进行检测进而对患者加以区分,有助于缓解患者的经济负担。因此,研究和建立相关研究模型与研究方法,对患者对...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ccRCC组织标本的病理染色（H&E染色）结果
青岛大学硕士学位论文14图1.2在ccRCC细胞系以及PDCs中进行分子靶向药物作用靶标（受体酪氨酸蛋白激酶以及MAPK、PI3K/AKT信号通路所属蛋白激酶）的表达检测使用定量PCR（qPCR）检测ccRCC细胞系Caki-1、Caki-2、786-O以及5株ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标（RTKs等）的表达水平。依据其相对表达量（相对于内参β-Actin的表达水平）绘制热图标尺显示为表达量的上限与下限Figure1.2DetectionoftheexpressionoftargetsofmoleculartargetingagentsinccRCCcelllines,Caki-1,Caki-2or786-OandfivelinesofccRCCPDCs.QuantitativePCR(qPCR)wasusedtodetecttheexpressionlevelsoftargetsofmoleculartargetingagents(RTKs,etc.)intheccRCCcelllinesCaki-1,Caki-2,786-O,andccRCCPDCs.Heatmapbasedonitsrelativeexpressionlevel(relativetotheexpressionlevelofβ-Actinintheinternalreference/loadingcontrol).3.3对ccRCCPDCs进行长期体外培养其分子靶向药物作用靶标的表达出现明显下降现已证实，恶性肿瘤细胞在肿瘤组织内部的存活与增殖等生物学行为，受到了组织微环境、肿瘤组织间质以及机体内环境等的共同作用，其生物行为学特征等与体外培养（细胞在培养瓶、培养皿中进行充分伸展的贴壁生长）环境与条件截然不同，因此经过体外长期培养的肿瘤细胞系，其特性与生物学行为与肿瘤组织内的肿瘤细胞存在很大差异。而ccRCC细胞对分子靶向药物的敏感性/临床应答的基础便是ccRCC细胞中这些分子靶向药物作用靶标的表达量。为此，我们在前述研究基础上（3.1部分与3.2部分），对不同培养/扩增方法/条件对ccRCCPDCs细胞中分子靶向药物作用靶标的表达进行了
第一部分：利用透明细胞肾癌患者来源细胞系建立裸鼠肿瘤模型15检测。结果如图3-图12（VEFR-1[图1.3]、VEGFR-2[图1.4]、VEGFR-3[图1.5]、PDGFR-α[图1.6]、PDGFR-β[图1.7]、c-Kit[图1.8]、AKT[图1.9]、ERK-1[图1.10]以及ERK-2[图1.11]）所示，经过长期的体外培养（1周、两周和3周），ccRCCPDCs中分子靶向药物的作用靶标逐渐下降。这表明，体外培养ccRCCPDCs能够改变ccRCCPDCs的特性，经过长期体外培养，ccRCCPDCs细胞会逐渐丢失一些分子靶向药物的作用靶标。3.4ccRCCPDCs的制备及其质量控制进一步在前述研究（3.1部分、3.2部分以及3.3部分）基础上，进一步利用裸鼠成瘤的方法对ccRCCPDCs进行了扩增，结果如图1.3-图1.12（VEFR-1[图1.3]、VEGFR-2[图1.4]、VEGFR-3[图1.5]、PDGFR-α[图1.6]、PDGFR-β[图1.7]、c-Kit[图1.8]、AKT[图1.9]、ERK-1[图1.10]以及ERK-2[图1.11]）所示，通过裸鼠成瘤作用实现ccRCCPDCs的扩增（通过裸鼠成瘤的方法对ccRCCPDCs实现3次扩增），ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标的表达能够保持稳定（图1.3）。这表明，通过裸鼠成瘤作用实现ccRCCPDCs的扩增能够保持其自身特性的稳定，反映出其在患者体内的特征。图1.3通过体外培养或裸鼠成瘤作用实现5株ccRCCPDCs的扩增以及不同扩增方法对ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标VEGFR-1表达的影响分别通过体外培养以及裸鼠成瘤的方法实现ccRCCPDCs的扩增，再使用定量PCR检测ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标（VEGFR-1）的表达水平。依据不同组中目标基因相对表达量（相对于β-Actin的倍数）绘制折线图
本文编号：3574277
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ccRCC组织标本的病理染色（H&E染色）结果
青岛大学硕士学位论文14图1.2在ccRCC细胞系以及PDCs中进行分子靶向药物作用靶标（受体酪氨酸蛋白激酶以及MAPK、PI3K/AKT信号通路所属蛋白激酶）的表达检测使用定量PCR（qPCR）检测ccRCC细胞系Caki-1、Caki-2、786-O以及5株ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标（RTKs等）的表达水平。依据其相对表达量（相对于内参β-Actin的表达水平）绘制热图标尺显示为表达量的上限与下限Figure1.2DetectionoftheexpressionoftargetsofmoleculartargetingagentsinccRCCcelllines,Caki-1,Caki-2or786-OandfivelinesofccRCCPDCs.QuantitativePCR(qPCR)wasusedtodetecttheexpressionlevelsoftargetsofmoleculartargetingagents(RTKs,etc.)intheccRCCcelllinesCaki-1,Caki-2,786-O,andccRCCPDCs.Heatmapbasedonitsrelativeexpressionlevel(relativetotheexpressionlevelofβ-Actinintheinternalreference/loadingcontrol).3.3对ccRCCPDCs进行长期体外培养其分子靶向药物作用靶标的表达出现明显下降现已证实，恶性肿瘤细胞在肿瘤组织内部的存活与增殖等生物学行为，受到了组织微环境、肿瘤组织间质以及机体内环境等的共同作用，其生物行为学特征等与体外培养（细胞在培养瓶、培养皿中进行充分伸展的贴壁生长）环境与条件截然不同，因此经过体外长期培养的肿瘤细胞系，其特性与生物学行为与肿瘤组织内的肿瘤细胞存在很大差异。而ccRCC细胞对分子靶向药物的敏感性/临床应答的基础便是ccRCC细胞中这些分子靶向药物作用靶标的表达量。为此，我们在前述研究基础上（3.1部分与3.2部分），对不同培养/扩增方法/条件对ccRCCPDCs细胞中分子靶向药物作用靶标的表达进行了
第一部分：利用透明细胞肾癌患者来源细胞系建立裸鼠肿瘤模型15检测。结果如图3-图12（VEFR-1[图1.3]、VEGFR-2[图1.4]、VEGFR-3[图1.5]、PDGFR-α[图1.6]、PDGFR-β[图1.7]、c-Kit[图1.8]、AKT[图1.9]、ERK-1[图1.10]以及ERK-2[图1.11]）所示，经过长期的体外培养（1周、两周和3周），ccRCCPDCs中分子靶向药物的作用靶标逐渐下降。这表明，体外培养ccRCCPDCs能够改变ccRCCPDCs的特性，经过长期体外培养，ccRCCPDCs细胞会逐渐丢失一些分子靶向药物的作用靶标。3.4ccRCCPDCs的制备及其质量控制进一步在前述研究（3.1部分、3.2部分以及3.3部分）基础上，进一步利用裸鼠成瘤的方法对ccRCCPDCs进行了扩增，结果如图1.3-图1.12（VEFR-1[图1.3]、VEGFR-2[图1.4]、VEGFR-3[图1.5]、PDGFR-α[图1.6]、PDGFR-β[图1.7]、c-Kit[图1.8]、AKT[图1.9]、ERK-1[图1.10]以及ERK-2[图1.11]）所示，通过裸鼠成瘤作用实现ccRCCPDCs的扩增（通过裸鼠成瘤的方法对ccRCCPDCs实现3次扩增），ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标的表达能够保持稳定（图1.3）。这表明，通过裸鼠成瘤作用实现ccRCCPDCs的扩增能够保持其自身特性的稳定，反映出其在患者体内的特征。图1.3通过体外培养或裸鼠成瘤作用实现5株ccRCCPDCs的扩增以及不同扩增方法对ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标VEGFR-1表达的影响分别通过体外培养以及裸鼠成瘤的方法实现ccRCCPDCs的扩增，再使用定量PCR检测ccRCCPDCs中分子靶向药物作用靶标（VEGFR-1）的表达水平。依据不同组中目标基因相对表达量（相对于β-Actin的倍数）绘制折线图
本文编号：3574277
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