肌醇六磷酸通过PI3K/Akt信号通路对结肠癌HT-29细胞生长的影响

发布时间：2022-01-07 16:59

　　目的:通过研究PI3K/Akt信号通路在肌醇六磷酸（inositol hexaphosphate,IP6）抑制结肠癌HT-29细胞生长中的作用,探讨IP6诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:1.体外培养结肠癌HT-29细胞,使用不同浓度的IP6（0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L）进行干预,并依此浓度分组,干预24 h和48h。2.MTT法检测不同浓度的IP6（0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L）对结肠癌细胞分别干预24h和48h生长抑制作用效果。3.应用流式细胞仪技术,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度IP6组对结肠癌细胞干预48h后的细胞凋亡率。4.Western-blot检测PI3K、p Akt、Akt和caspase-9蛋白的表达情况。5.Real-time PCR检测PI3K、Akt、caspase-9、m TOR和NF-κB m RNA的表达情况。结果:1.随IP6干预浓度的增加和时间的延长,IP6对HT-29细胞生长的抑制作用逐渐... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第1章 材料与方法
    1.1 细胞及主要试剂
    1.2 主要仪器
    1.3 溶液配制
    1.4 实验方法
        1.4.1 细胞培养、传代、冻存和复苏
        1.4.2 药物干预
        1.4.3 实验分组
        1.4.4 MTT实验
        1.4.5 流式细胞仪检测细胞凋亡（AnnexinV-FITC/PI双染法）
        1.4.6 蛋白样品制备
        1.4.7 BCA法测蛋白浓度
        1.4.8 western blot
        1.4.9 实时定量PCR（Real-time PCR）方法检细胞中mRNA的表达
            1.4.9.1 Trizol法RNA提取步骤
            1.4.9.2RNA浓度的测定
            1.4.9.3 引物的设计及合成
            1.4.9.4 反转录
            1.4.9.5 PCR扩增
        1.4.10 统计学处理
第2章 结果
    2.1 MTT比色法测定IP_6对HT-29细胞凋亡的诱导作用效果
    2.2 Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡
    2.3 IP_6对PI3K、Akt、pAkt、caspase-9 蛋白表达的影响
    2.4 IP_6抑制HT-29细胞PI3K、Akt、caspase-9 及mTOR mRNA的表达，上调caspase-9 及NF-κ B mRNA的表达
        2.4.1 IP_6作用后对HT-29结肠癌细胞PI3K、Akt的mRNA表达的影响
        2.4.2 IP_6作用后对HT-29结肠癌细胞caspase-9mRNA表达的影响
        2.4.3 IP_6作用后对HT-29结肠癌细胞mTOR mRNA表达的影响
        2.4.4 IP_6作用后对HT-29结肠癌细胞NF-κ B mRNA表达的影响
第3章 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
缩略词表
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]植酸对人胶质瘤细胞U118MG增殖和凋亡的影响[J]. 罗国轩,张勇,刘峰.  中国医疗前沿. 2013(05)
[2]红花多糖抑制PI3K/Akt信号通路诱导人胃癌细胞凋亡的研究[J]. 陶冀,黎清炜,石学魁,梁颖,王亚贤.  实用肿瘤学杂志. 2012 (02)
[3]哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在人结肠癌中的表达及其对HT-29细胞增殖凋亡的影响[J]. 张志永,张谢夫.  中华医学杂志. 2011 (41)
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[7]PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞SGC7901生长的研究[J]. 安俊平,朱正秋.  辽宁医学院学报. 2010(06)
[8]植物抗营养成分研究概况[J]. 张晨曦,巩江,章晓凤,侯恩太,路锋,骆蓉芳,倪士峰.  安徽农业科学. 2010(15)
[9]肌酸六磷酸对裸鼠皮下移植HT-29细胞瘤的生长抑制作用研究[J]. 李敏,宋扬.  营养学报. 2010(02)
[10]PI3K-Akt信号通路与胃癌的研究进展[J]. 杨宁,王恬,惠起源.  现代肿瘤医学. 2010(01)

硕士论文
[1]IP6对人肝癌细胞HepG2细胞周期及相关调控因子的影响[D]. 李馨.青岛大学 2011



本文编号：3574919