CLDN6通过PTEN/Akt通路调控p53对结直肠癌细胞增殖的抑制作用
发布时间：2022-01-13 10:11
紧密连接（Tight junctions,TJs）蛋白CLDNs在结直肠癌等多种上皮源性的恶性肿瘤中表达异常,并通过不同的分子机制影响肿瘤的增殖能力。作为紧密连接蛋白CLDNs家族成员之一,Claudin-6（CLDN6）包含一个氨基末端、一个羧基末端和两个胞外环结构。CLDN6羧基末端的PDZ结合基序可与含PDZ结构域的信号蛋白（如ZO-1等）结合,参与信号传递过程,从而在肿瘤细胞增殖的调控中发挥重要作用。本课题组前期工作发现,CLDN6在结直肠癌细胞中低表达;过表达CLDN6显著抑制结直肠癌细胞的增殖。此外,在乳腺癌细胞MCF-7中,CLDN6上调p53的表达介导化疗耐药。同时,预实验结果表明,在结直肠癌细胞中,CLDN6上调p53的表达。由此我们推测,CLDN6抑制结直肠癌细胞的增殖与上调p53的表达有关。p53是一种抑癌基因,当细胞受到电离辐射、致癌剂及突变剂等刺激时,p53蛋白与DNA结合,发挥转录因子的作用,通过激活下游靶基因p21的转录,阻滞细胞周期和修复DNA,若修复失败则诱导细胞凋亡。然而,p53突变或缺失的细胞中,由于无法修复DNA,细胞异常增殖,发展为恶性肿瘤。p...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CLDN6在结直肠癌组织中的表达
第3章结果19图3.2CLDN6在结直肠癌细胞中的表达A：CLDN6的表达B：CLDN6表达的柱状统计图*注：P＜0.05**注：P＜0.013.2CLDN6抑制结直肠癌细胞的增殖能力3.2.1构建过表达CLDN6的细胞株为了检测CLDN6对结直肠癌细胞增殖能力的作用是否与p53有关，我们选取了结直肠癌细胞HCT116p53+/+和HCT116p53-/-，并在细胞中构建过表达CLDN6的稳转细胞株。首先，我们鉴定HCT116p53+/+和HCT116p53-/-细胞中p53的表达，HCT116p53-/-细胞中p53在mRNA和蛋白水平基本不表达（PmRNA=0.0061<0.01，P蛋白=0.0148<0.05）（图3.3A）。随后，将构建带有绿色荧光蛋白的空载体质粒和过表达CLDN6的质粒分别与辅助质粒（pVSVG、gag-pol和rev）共转染293T细胞(图3.3B)，收取病毒上清液感染HCT116p53+/+和HCT116p53-/-细胞。经过嘌呤霉素稳定筛选后，在荧光显微镜下采集图像评估转染效率。结果如图3.3C所示，细胞转染阳性率达90%以上。通过RT-PCR和Western-Blot鉴定CLDN6的表达水平。结果显示，与空载组相比，过表达CLDN6组中CLDN6的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加（HCT116p53+/+细胞PmRNA=0.0002<0.001，P蛋白=0.0140<0.05；HCT116p53-/-细胞PmRNA=0.0023<0.01，P蛋白=0.0465<0.05）（图3.3D）。免疫荧光实验结果显示CLDN6主要分布于细
第3章结果20胞膜及细胞质中（图3.3E）。提示，成功构建了过表达CLDN6的结直肠癌细胞株。图3.3构建过表达CLDN6的稳转细胞株A：p53野生型及缺失型HCT116细胞株的鉴定及柱状统计图B：293T细胞中包装过表达CLDN6的慢病毒（bar=200μm）C：HCT116细胞系病毒感染情况（bar=50μm）D：鉴定过表达CLDN6的稳转细胞株E：CLDN6的亚细胞定位*注：P＜0.05**注：P＜0.01***注：P＜0.001
【参考文献】：
期刊论文
[1]Colorectal cancer screening: An updated review of the available options[J]. Iyad A Issa,Malak Noureddine. World Journal of Gastroenterology. 2017(28)
[2]Tight junctions in inflammatory bowel diseases and inflammatory bowel disease associated colorectal cancer[J]. Jonathan Landy,Emma Ronde,Nick English,Sue K Clark,Ailsa L Hart,Stella C Knight,Paul J Ciclitira,Hafid Omar Al-Hassi. World Journal of Gastroenterology. 2016(11)
硕士论文
[1]CLDN6通过JAK2/STAT3信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7的迁移和侵袭[D]. 赵帅.吉林大学 2017
本文编号：3586218
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CLDN6在结直肠癌组织中的表达
第3章结果19图3.2CLDN6在结直肠癌细胞中的表达A：CLDN6的表达B：CLDN6表达的柱状统计图*注：P＜0.05**注：P＜0.013.2CLDN6抑制结直肠癌细胞的增殖能力3.2.1构建过表达CLDN6的细胞株为了检测CLDN6对结直肠癌细胞增殖能力的作用是否与p53有关，我们选取了结直肠癌细胞HCT116p53+/+和HCT116p53-/-，并在细胞中构建过表达CLDN6的稳转细胞株。首先，我们鉴定HCT116p53+/+和HCT116p53-/-细胞中p53的表达，HCT116p53-/-细胞中p53在mRNA和蛋白水平基本不表达（PmRNA=0.0061<0.01，P蛋白=0.0148<0.05）（图3.3A）。随后，将构建带有绿色荧光蛋白的空载体质粒和过表达CLDN6的质粒分别与辅助质粒（pVSVG、gag-pol和rev）共转染293T细胞(图3.3B)，收取病毒上清液感染HCT116p53+/+和HCT116p53-/-细胞。经过嘌呤霉素稳定筛选后，在荧光显微镜下采集图像评估转染效率。结果如图3.3C所示，细胞转染阳性率达90%以上。通过RT-PCR和Western-Blot鉴定CLDN6的表达水平。结果显示，与空载组相比，过表达CLDN6组中CLDN6的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加（HCT116p53+/+细胞PmRNA=0.0002<0.001，P蛋白=0.0140<0.05；HCT116p53-/-细胞PmRNA=0.0023<0.01，P蛋白=0.0465<0.05）（图3.3D）。免疫荧光实验结果显示CLDN6主要分布于细
第3章结果20胞膜及细胞质中（图3.3E）。提示，成功构建了过表达CLDN6的结直肠癌细胞株。图3.3构建过表达CLDN6的稳转细胞株A：p53野生型及缺失型HCT116细胞株的鉴定及柱状统计图B：293T细胞中包装过表达CLDN6的慢病毒（bar=200μm）C：HCT116细胞系病毒感染情况（bar=50μm）D：鉴定过表达CLDN6的稳转细胞株E：CLDN6的亚细胞定位*注：P＜0.05**注：P＜0.01***注：P＜0.001
【参考文献】：
期刊论文
[1]Colorectal cancer screening: An updated review of the available options[J]. Iyad A Issa,Malak Noureddine. World Journal of Gastroenterology. 2017(28)
[2]Tight junctions in inflammatory bowel diseases and inflammatory bowel disease associated colorectal cancer[J]. Jonathan Landy,Emma Ronde,Nick English,Sue K Clark,Ailsa L Hart,Stella C Knight,Paul J Ciclitira,Hafid Omar Al-Hassi. World Journal of Gastroenterology. 2016(11)
硕士论文
[1]CLDN6通过JAK2/STAT3信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7的迁移和侵袭[D]. 赵帅.吉林大学 2017
本文编号：3586218
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3586218.html
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