TMEM166在肝细胞癌中的抑癌功能及表达调控机制研究
发布时间：2022-01-16 01:19
目的:原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是常见恶性肿瘤,分子靶向治疗被证实可显著改善晚期肝癌患者的预后。发现新的肿瘤调控分子对深入解析HCC的发病机制,寻找有效的治疗靶点至关重要。内质网跨膜蛋白166（transmembrane protein 166,TMEM166）,在人胃癌、神经母细胞瘤等肿瘤中具有重要的抑癌功能,主要通过影响细胞自噬和细胞凋亡发挥作用,然而TMEM166在HCC中的功能及机制尚不清楚;研究表明多种microRNA在HCC中上调参与HCC的发生发展,TMEM166在HCC中的表达下调是否受microRNA分子的调控,这一问题的解答将有助于HCC发病机制的阐明。本研究将对TMEM166在肝细胞癌中的功能和机制进行探讨,并从上游micro RNA角度对其表达调控机制进行初步的解析。方法:首先通过生物信息学方法对TCGA数据库中TMEM166在HCC中的表达和临床意义进行相关性分析;收集30例病人样本,通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、免疫组化、蛋白质免疫印迹法检测和验证TMEM166在HCC组织和成对癌旁组织中的表达,并...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TMEM166在HCC的疾病进展程度和患者生存期显著相关（A）以log2(TPM+1)分析TMEM166在369个HCC肿瘤样本与50个正常肝组织的表达（源于
结果21图3TMEM166在人HCC细胞系中表达降低（A）从L02细胞、QGY-7703细胞和Hccl-M3细胞中提取mRNA，用TMEM166特异性引物RT-qPCR分析TMEM166mRNA的表达。（B）分别裂解肝细胞和HCC细胞系，提取蛋白，Westernblot检测TMEM166的蛋白表达。以GAPDH为内参。（C）免疫荧光法检测内源TMEM166蛋白在肝细胞和HCC细胞系中的表达。BF代表明常标尺，100μm。（D）统计分析C中TMEM166蛋白表达的荧光强度。数据以三次重复实验的平均值±标准差表示。***P<0.001
青岛大学硕士学位论文224.TMEM166抑制肝癌细胞的增殖TMEM166在肝癌组织和细胞系中低表达的一致性，提示我们利用人肝癌细胞系过表达TMEM166来研究其是否具有抗肿瘤功能。选择三种HCC细胞系Hccl-M3、Huh7、QGY-7703作为细胞模型，用Myc标签的TMEM166质粒转染细胞，24h后，用Myc标签体染色，荧光显微镜观察，转染效率约为68%（图4A，B）。为了研究TMEM166对HCC细胞增殖的影响，我们在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703细胞中分别转染TMEM166-Myc或Myc-tag空载体(作为对照)，1-4天的时间点分别用MTT法检测细胞活力。结果显示，过表达TMEM166的三种HCC细胞系的增殖能力明显下降（P<0.01，图4C）。这表明，TMEM166能有效抑制肝癌细胞的增殖。图4过表达TMEM166可抑制肝癌细胞的增殖（A和B）在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703细胞转染Myc标签的TMEM166质粒，转染24h后，用Myc标签抗体染色，荧光显微镜观察。TMEM166-Myc在肝癌细胞中的转染效率通过比较荧
【参考文献】：
期刊论文
[1]神经干细胞的三维培养及其在神经疾病中应用的研究进展[J]. 赵范范,章丽娜,商迎辉,劳凤学. 中国生物制品学杂志. 2020(02)
[2]神经干细胞修复创伤性脑损伤及其影响因素的研究进展[J]. 陈佳树,宋灏哲,陈天,谢川平,赵格晶娃,李力卓. 创伤外科杂志. 2020(01)
[3]原发性肝细胞癌的分子靶向治疗进展[J]. 辛海光,周惠娟,谢青. 肝脏. 2019(07)
[4]Role of autophagy in tumorigenesis,metastasis,targeted therapy and drug resistance of hepatocellular carcinoma[J]. Fang Huang,Bing-Rong Wang,Yi-Gang Wang. World Journal of Gastroenterology. 2018(41)
[5]局部脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织TMEM166的表达及其与脑细胞凋亡的关系[J]. 王瑜,周凌雪,王天龙,赵磊,李丽. 现代生物医学进展. 2018(12)
[6]原发性肝癌诊疗规范（2017年版）[J]. 消化肿瘤杂志(电子版). 2017(04)
[7]Controversies regarding and perspectives on clinical utility of biomarkers in hepatocellular carcinoma[J]. Pei-Pei Song,Ju-Feng Xia,Yoshinori Inagaki,Kiyoshi Hasegawa,Yoshihiro Sakamoto,Norihiro Kokudo,Wei Tang. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[8]凋亡相关基因膜转运蛋白166启动子区CpG岛甲基化在新疆汉族和维吾尔族食管鳞状细胞癌中作用[J]. 于鹏,陈骏,张国庆,于亮. 中华实用诊断与治疗杂志. 2015(09)
[9]心律失常发病机制研究进展[J]. 杨宝峰,蔡本志. 国际药学研究杂志. 2010(02)
本文编号：3591654
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TMEM166在HCC的疾病进展程度和患者生存期显著相关（A）以log2(TPM+1)分析TMEM166在369个HCC肿瘤样本与50个正常肝组织的表达（源于
结果21图3TMEM166在人HCC细胞系中表达降低（A）从L02细胞、QGY-7703细胞和Hccl-M3细胞中提取mRNA，用TMEM166特异性引物RT-qPCR分析TMEM166mRNA的表达。（B）分别裂解肝细胞和HCC细胞系，提取蛋白，Westernblot检测TMEM166的蛋白表达。以GAPDH为内参。（C）免疫荧光法检测内源TMEM166蛋白在肝细胞和HCC细胞系中的表达。BF代表明常标尺，100μm。（D）统计分析C中TMEM166蛋白表达的荧光强度。数据以三次重复实验的平均值±标准差表示。***P<0.001
青岛大学硕士学位论文224.TMEM166抑制肝癌细胞的增殖TMEM166在肝癌组织和细胞系中低表达的一致性，提示我们利用人肝癌细胞系过表达TMEM166来研究其是否具有抗肿瘤功能。选择三种HCC细胞系Hccl-M3、Huh7、QGY-7703作为细胞模型，用Myc标签的TMEM166质粒转染细胞，24h后，用Myc标签体染色，荧光显微镜观察，转染效率约为68%（图4A，B）。为了研究TMEM166对HCC细胞增殖的影响，我们在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703细胞中分别转染TMEM166-Myc或Myc-tag空载体(作为对照)，1-4天的时间点分别用MTT法检测细胞活力。结果显示，过表达TMEM166的三种HCC细胞系的增殖能力明显下降（P<0.01，图4C）。这表明，TMEM166能有效抑制肝癌细胞的增殖。图4过表达TMEM166可抑制肝癌细胞的增殖（A和B）在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703细胞转染Myc标签的TMEM166质粒，转染24h后，用Myc标签抗体染色，荧光显微镜观察。TMEM166-Myc在肝癌细胞中的转染效率通过比较荧
【参考文献】：
期刊论文
[1]神经干细胞的三维培养及其在神经疾病中应用的研究进展[J]. 赵范范,章丽娜,商迎辉,劳凤学. 中国生物制品学杂志. 2020(02)
[2]神经干细胞修复创伤性脑损伤及其影响因素的研究进展[J]. 陈佳树,宋灏哲,陈天,谢川平,赵格晶娃,李力卓. 创伤外科杂志. 2020(01)
[3]原发性肝细胞癌的分子靶向治疗进展[J]. 辛海光,周惠娟,谢青. 肝脏. 2019(07)
[4]Role of autophagy in tumorigenesis,metastasis,targeted therapy and drug resistance of hepatocellular carcinoma[J]. Fang Huang,Bing-Rong Wang,Yi-Gang Wang. World Journal of Gastroenterology. 2018(41)
[5]局部脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织TMEM166的表达及其与脑细胞凋亡的关系[J]. 王瑜,周凌雪,王天龙,赵磊,李丽. 现代生物医学进展. 2018(12)
[6]原发性肝癌诊疗规范（2017年版）[J]. 消化肿瘤杂志(电子版). 2017(04)
[7]Controversies regarding and perspectives on clinical utility of biomarkers in hepatocellular carcinoma[J]. Pei-Pei Song,Ju-Feng Xia,Yoshinori Inagaki,Kiyoshi Hasegawa,Yoshihiro Sakamoto,Norihiro Kokudo,Wei Tang. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[8]凋亡相关基因膜转运蛋白166启动子区CpG岛甲基化在新疆汉族和维吾尔族食管鳞状细胞癌中作用[J]. 于鹏,陈骏,张国庆,于亮. 中华实用诊断与治疗杂志. 2015(09)
[9]心律失常发病机制研究进展[J]. 杨宝峰,蔡本志. 国际药学研究杂志. 2010(02)
本文编号：3591654
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