金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分通过p38/ERK MAPK信号通路诱导非小细胞肺癌细胞的凋亡与周期阻滞
发布时间：2022-02-13 15:20
目的非小细胞肺癌（NSCLC）是最常见的肺癌组织学亚型,占肺癌的80%左右。补体C5a的受体（C5a R）在肿瘤中的表达常与病情的严重程度和患者的预后相关,其在非小细胞肺癌组织中的表达较癌旁组织高。金黄色葡萄球菌分泌的PV-杀白细胞素（Panton-Valentine leukocidin,PVL）由Luk F-PV和LukS-PV双组分组成,其中LukS-PV能靶向结合C5a R,抑制白血病细胞增殖与侵袭,诱导凋亡及分化。我们推测在C5a R表达增高的非小细胞肺癌细胞中LukS-PV可能发挥相似的生物学作用。本课题从细胞的增殖,迁移,凋亡和周期多方面进行研究,探讨LukS-PV对非小细胞肺癌细胞A549、H460的作用及机制。方法（1）体外培养正常肺上皮细胞16-HBE及非小细胞肺癌细胞A549、H460,用不同浓度LukS-PV（0、0.25、0.5、0.75、1μM）刺激不同时间（0、12、24、36、48H）。（1）CCK-8试验检测LukS-PV对各组细胞活力的影响。（2）Ed U试验检测LukS-PV对A549、H460细胞增殖的影响。（2）利用Transwell试验检测L...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LukS-PV抑制NSCLC细胞迁移AA549和H460细胞分别用不同浓度的LukS-PV处理24h，WB检测迁移相关蛋白MMP-2表达
安徽医科大学硕士学位论文-30-图3LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡A,BA549和H460细胞分别用不同浓度的LukS-PV处理24h，然后用AnnexinV-FITC/PI染色，流式细胞术检测和分析细胞凋亡率。CWesternblot检测凋亡相关蛋白Bax、BCL-2水平。所有实验均重复三次。LukS-PV处理组与对照组相比;*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001Fig3LukS-PVinducesapoptosisinNSCLCcells.A,BA549andH460cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofLukS-PVfor24h,andthenstainedwithAnnexinV-FITC/PIandflowcytometrywasusedtomeasureandanalyzetheratioofapoptosis.Cthelevelsofapoptosis-relatedproteinsBaxandBCL-2weredeterminedbyWesternblot.Allexperimentswereperformedintriplicate.LukS-PV-treatedvs.Control;*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0013.4LukS-PV诱导NSCLC细胞周期阻滞为了研究LukS-PV对细胞增殖的抑制是否与细胞周期阻滞有关，我们对细胞周期进行了检测。我们分别使用不同浓度（0、0.25、0.5、0.75μM）的LukS-PV对A549和H460细胞作用24H后，采用流式细胞术检测细胞的周期。结果表明，
安徽医科大学硕士学位论文-31-与对照组相比，LukS-PV可增加S期A549细胞数量，减少G2/M期细胞数量；同时,LukS-PV还导致H460细胞在S期的比例升高，G0/G1期相应降低，即LukS-PV使细胞周期阻滞在S期(4A)。为进一步研究具体机制，我们对相关的周期蛋白进行了检测，Westernblotting结果显示，经LukS-PV处理后，细胞周期蛋白cyclinD1和CDK2表达下降，而P21表达增高，其与real-timePCR结果一致。此外，cyclin-A2的mRNA表达水平也降低（4B-C）。图4LukS-PV诱导NSCLC细胞周期阻滞A分别用不同浓度的LukS-PV处理A549和H460细胞24H，采用PI染色和流式细胞术检测细胞周期分布。B用0.5μM浓度LukS-PV处理细胞24H，real-timePCR检测S期相关基因(P21,cyclinA2和cyclinD1)的表达。CWesternblot检测S期相关蛋白的表达。所有实验均重复三次。LukS-PV处理组与对照组相比；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001Fig4LukS-PVinducescellcyclearrestinNSCLCcells.AA549andH460cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofLukS-PVfor24H,andcellcycledistributionwasmeasuredand
本文编号：3623433
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LukS-PV抑制NSCLC细胞迁移AA549和H460细胞分别用不同浓度的LukS-PV处理24h，WB检测迁移相关蛋白MMP-2表达
安徽医科大学硕士学位论文-30-图3LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡A,BA549和H460细胞分别用不同浓度的LukS-PV处理24h，然后用AnnexinV-FITC/PI染色，流式细胞术检测和分析细胞凋亡率。CWesternblot检测凋亡相关蛋白Bax、BCL-2水平。所有实验均重复三次。LukS-PV处理组与对照组相比;*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001Fig3LukS-PVinducesapoptosisinNSCLCcells.A,BA549andH460cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofLukS-PVfor24h,andthenstainedwithAnnexinV-FITC/PIandflowcytometrywasusedtomeasureandanalyzetheratioofapoptosis.Cthelevelsofapoptosis-relatedproteinsBaxandBCL-2weredeterminedbyWesternblot.Allexperimentswereperformedintriplicate.LukS-PV-treatedvs.Control;*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0013.4LukS-PV诱导NSCLC细胞周期阻滞为了研究LukS-PV对细胞增殖的抑制是否与细胞周期阻滞有关，我们对细胞周期进行了检测。我们分别使用不同浓度（0、0.25、0.5、0.75μM）的LukS-PV对A549和H460细胞作用24H后，采用流式细胞术检测细胞的周期。结果表明，
安徽医科大学硕士学位论文-31-与对照组相比，LukS-PV可增加S期A549细胞数量，减少G2/M期细胞数量；同时,LukS-PV还导致H460细胞在S期的比例升高，G0/G1期相应降低，即LukS-PV使细胞周期阻滞在S期(4A)。为进一步研究具体机制，我们对相关的周期蛋白进行了检测，Westernblotting结果显示，经LukS-PV处理后，细胞周期蛋白cyclinD1和CDK2表达下降，而P21表达增高，其与real-timePCR结果一致。此外，cyclin-A2的mRNA表达水平也降低（4B-C）。图4LukS-PV诱导NSCLC细胞周期阻滞A分别用不同浓度的LukS-PV处理A549和H460细胞24H，采用PI染色和流式细胞术检测细胞周期分布。B用0.5μM浓度LukS-PV处理细胞24H，real-timePCR检测S期相关基因(P21,cyclinA2和cyclinD1)的表达。CWesternblot检测S期相关蛋白的表达。所有实验均重复三次。LukS-PV处理组与对照组相比；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001Fig4LukS-PVinducescellcyclearrestinNSCLCcells.AA549andH460cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofLukS-PVfor24H,andcellcycledistributionwasmeasuredand
本文编号：3623433
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