RANKL/RANK通路介导乳腺癌MCF-7细胞对阿霉素耐药机制的研究

发布时间：2022-02-17 22:36

　　目的观察NF-κB活化因子受体（RANK）及其配体（RANKL）通路对乳腺癌细胞耐药性的影响,并研究其机制。方法培养人乳腺癌野生型细胞系MCF-7及其同源的阿霉素耐药细胞系MCF7/ADR,用免疫荧光技术及Western blot检测MCF-7及MCF7/ADR中RANK蛋白表达情况;分别用50ng/ml和100ng/ml的RANKL作用于两种细胞,用Western blot检测作用前后两种细胞中乙醛脱氢酶1（ALDH1）蛋白表达情况;在100ng/ml RANKL作用下的MCF-7细胞中加入500ng/ml骨保护素OPG,用Western blot检测作用前后MCF-7细胞中乙醛脱氢酶1（ALDH1）蛋白表达情况。应用CCK-8法检测三种浓度的RANKL作用前后MCF-7细胞在阿霉素作用下的细胞存活率。构建RANK过表达慢病毒载体并感染MCF-7细胞,同时感染无义序列作为阴性对照,空白对照组不作处理。结果免疫荧光技术及Western blot结果显示,RANK蛋白在MCF7/ADR中的表达较MCF-7均明显增强（P<0.05）;且MCF7/ADR细胞中ALDH1蛋白表达量明显高... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫荧光显微实验中MCF-7与MCF7/ADR的RANK蛋白表达

2.1 CCK-8法检测不同浓度的RANKL作用前后对MCF-7细胞增殖的影响K-8法检测不同浓度的RANKL干预作用前后MCF-7细胞增殖的影响结果，如图3（左示，在阿霉素作用48小时后，随着阿霉素浓度的升高，RANKL作用后的MCF-7细胞存较未干预组明显升高。而随着RANKL浓度的升高，表现出明显的剂量依赖性，细胞存越高。在阿霉素浓度为2.5μmol/L和5μmol/L时，RANKL50ng/ml组和100ng/ml组较未组的细胞存活率具有明显差异，且差异有统计学意义（P＜0.05）。2.2 加入RANKL的竞争性抑制剂OPG作用前后对MCF-7细胞增殖的影响入RANKL的竞争性抑制剂OPG作用进行对比（图3右），在阿霉素作用48小时后，同霉素浓度下，加入RANKL100ng/ml及OPG500ng/ml的双重作用组与RANKL100ng/m较，MCF-7细胞的存活率明显下降，当阿霉素浓度为2.5μmol/L和5μmol/L时，差异具计学意义（P＜0.05），且RANKL100ng/ml及OPG 500ng/ml双重作用组与未干预组存并无明显差异（P＞0.05）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]BCRP/ABCG2的结构功能及相关抑制剂研究[J]. 应帅,郑婷婷,陈培远,郭辉辉,许传莲.  中国医药生物技术. 2013(03)
[2]人乳腺癌多耐药细胞株中ALDH1,P-gp及CD44v6的表达研究[J]. 洪理泉,柯卫锋,潘峰,陈兆军,刘玉华.  中国卫生检验杂志. 2012(02)



本文编号：3630228