槐耳醇提取物联合西仑吉肽调控整合素β5抑制胃癌细胞转移的机制研究

发布时间：2022-02-18 18:30

　　槐耳醇提取物联合西仑吉肽调控整合素β5抑制胃癌细胞转移的机制研究目的建立从槐耳醇粗提取物中富集有效成分的方法,并评估槐耳醇提取物（TMTF）有效成分的药物毒性和抑制肿瘤转移效果。重点围绕TMTF抑制胃癌转移作用靶点,聚焦其联合西仑吉肽调控整合素β5阻滞细胞上皮间质转化（EMT）相关信号通路的机制。为中药联合整合素类抑制剂的抗肿瘤原理提供理论基础。方法1.槐耳醇粗提取物纯化实验:通过柱层析方法和超声-乙醇萃取法,富集黄酮类化合物,并以芦丁为标准品,采用NaNO2-Al（NO3）3法测定含量。2.急性毒性评价试验:选取野生型AB品系斑马鱼一次性给予TMTF 25μg/mL,第3天观察斑马鱼各器官的反应情况,以确定毒性发生率。3.胃癌的生长和转移抑制实验:显微注射CM-Dil标记的人胃癌细胞至2dpf正常野生型AB品系斑马鱼卵黄囊内,同急性毒性评价试验给药,培养至5 dpf,荧光强度评价槐耳提取物对胃癌细胞生长和转移抑制的作用。4.细胞克隆形成、增殖、迁移、侵袭实验:借助CCK8试剂、划痕插件和细胞小室,观察胃癌细胞在TMTF药物作用下的细胞克隆大小和数量、细胞增殖速度、迁移距离和细胞穿膜数... 

【文章来源】：浙江中医药大学浙江省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 槐耳醇提取物(TMTF)的提取工艺优化
    一、材料与方法
        (一) 实验材料
            1. 槐耳醇粗提物
            2. 实验对象
            3. 主要仪器
            4. 主要实验试剂和耗材以及配制试剂
        (二) 实验方法
            1. TMTF的样本制备
            2. TMTF的纯化方法
            3. TMTF液质联用前样本处理
            4. 总黄酮含量测定方法
            5. 急性毒性评价试验
            6. 胃癌的生长和转移抑制实验
            7. 统计分析
    二、结果
        (一) 槐耳正丁醇提取物有效部位-TMTF的纯化
        (二) TMTF的液质联用分析
        (三) TMTF的药物毒性实验及对胃癌细胞转移抑制作用
    三、分析与讨论
        (一) 槐耳醇提取物的纯化及药物毒性分析
        (二) 不足与展望
第二部分 槐耳醇提取物联合西仑吉肽调控整合素β5抑制胃癌细胞转移的机制研究
    一、材料与方法
        (一) 实验材料
            1. 实验对象
            2. 主要仪器
            3. 主要实验试剂和耗材以及配制试剂
        (二) 实验方法
            1. 细胞培养
            2. 细胞活力检测
            3. 免疫印迹
            4. mRNA表达水平测定
            5. 细胞迁移实验
            6. 细胞侵袭实验
            7. 细胞克隆形成实验
    二、结果
        (一)TMTF对整合素家族蛋白的影响
        (二) 整合素家族在胃癌数据库中的表达分析及预后意义
        (三) 整合素β5在胃癌细胞系中的表达差异及其在胃癌细胞中的作用
        (四) 整合素β5与整合素家族及EMT相关蛋白的互作关系
        (五) TMTF联合西仑吉肽抑制胃癌细胞EMT相关蛋白的表达
    三、分析与讨论
        (一) 整合素β5是影响胃癌转移的关键因素
        (二) TMMF联合西仑吉肽协同调控整合素β5及EMT相关蛋白抑制胃癌转移
        (三) 不足与展望
结论
参考文献
附图
附表
致谢
文献综述 槐耳提取物抗肿瘤的研究进展
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3631335