结直肠癌预后相关长链非编码RNA的筛选及其功能验证

发布时间：2022-08-04 12:41

　　背景:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,目前,手术治疗和化疗仍然是临床上常用的治疗手段。随着靶向药物的出现,尽管其预后得到一定改善,但目前生存时间依旧没有突破30个月。长链非编码 RNAs（LncRNAs（Long noncoding RNAs））是一种长度超过 200nt 的非编码RNA,一直被认为是转录“噪音”。但近年来多项研究表明LncRNAs表达和功能的异常与多种疾病相关,可通过影响细胞增殖、凋亡、侵袭转移及耐药等生物学行为导致多种肿瘤的发生。目前为止,已有多个结直肠癌相关lncRNA被发现,但仍有很多的表达、功能及其机制不完全明确,需要进一步深入研究。鉴于LncRNA在细胞活动中的重要作用,对结直肠癌预后相关LncRNA的功能及其与肿瘤发生发展的关系的研究,探究其上下游可能的效应分子,明确其可能的信号通路,可为结直肠癌的生物靶向治疗提供新的治疗靶点,可能改善结直肠癌的预后。目的:利用生物信息学挖掘新的结直肠癌预后相关lncRNA,研究候选lncRNA FAM222A-AS1在结直肠癌中差异表达的临床意义,分析其对结直肠癌细... 

【文章页数】：110 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
基金资助
摘要
Abstract
英文缩略词表
1. 前言
2. 材料与方法
    2.1 主要实验仪器
    2.2 主要实验材料
        2.2.1 试剂
        2.2.2 溶液的配制
    2.3 技术路线
    2.4 FAM222A-AS1在结直肠癌中的筛选及预后价值
    2.5 FAM83H-AS1和FAM222A-AS1对结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响
        2.5.1 细胞株
        2.5.2 实验试剂
        2.5.3 实验耗材
        2.5.4 细胞复苏、传代培养及冻存
        2.5.5 引物及siRNA设计及合成
        2.5.6 qRT-PCR检测结直肠癌细胞株的lncRNA表达
        2.5.7 RNA干扰实验
        2.5.8 CCK-8细胞增殖实验
        2.5.9 Transwell细胞侵袭和迁移实验
        2.5.10 细胞划痕实验
        2.5.11 FAM222A-AS1细胞定位
        2.5.12 FAM222A-AS1干扰稳定转染细胞株的构建
        2.5.13 FAM222A-AS1过表达稳定转染细胞株的构建与转染
        2.5.14 FAM222A-AS1稳定转染细胞株体内体外功能试验
    2.6 结直肠癌细胞中FAM222A-AS1的分子机制探索
        2.6.1 实验仪器和耗材
        2.6.2 磷酸化抗体芯片
        2.6.3 Werstern Blot验证
        2.6.4 生物信息学预测相互作用靶基因
    2.7 统计学分析
3. 实验结果
    3.1 结直肠癌预后相关差异表达lncRNA
    3.2 候选lncRNA在结直肠癌中的差异表达
    3.3 候选lncRNA与结直肠癌患者预后的相关性
    3.4 候选lncRNA有效引物和siRNA
    3.5 候选lncRNA在细胞中的表达情况
    3.6 FAM83H-AS1和FAM222A-AS1对细胞增殖的影响
    3.7 FAM222A-AS1表达对细胞侵袭和迁移的影响
    3.8 FAM222A-AS1细胞定位
    3.9 稳定转染细胞株的构建
    3.10 稳转细胞株细胞功能验证
    3.11 动物实验
    3.12 磷酸化抗体芯片实验和WB实验验证结果
    3.13 生物信息预测FAM222A-AS1靶基因
4. 讨论
5. 结论
参考文献
综述 LncRNA在结直肠癌中的作用机制研究进展
    参考文献
个人简历及学术论文发表情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Long noncoding RNA RP4 functions as a competing endogenous RNA through miR-7-5p sponge activity in colorectal cancer[J]. Mu-Lin Liu,Qiao Zhang,Xiao Yuan,Long Jin,Li-Li Wang,Tao-Tao Fang,Wen-Bin Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(09)



本文编号：3669557