双氢青蒿素协同增强ABT-263抗非小细胞肺癌作用及分子机制研究

发布时间：2022-08-02 15:03

　　背景及目的:肺癌源于肺部恶性肿瘤细胞生长增殖失控,是发病率和死亡率增长最快、对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。按照病理学分类,肺癌可以分为小细胞肺癌（Small Cell Lung Cancer,SCLC）和非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）。其中,85%的病例为NSCLC患者。非小细胞肺癌发生的根本原因是肿瘤细胞中频繁地发生肿瘤驱动基因EGFR或Ras突变。双氢青嵩素（Dihydroartemisinin,DHA）是青蒿素的衍生物,属于倍半萜类化合物,对恶性疟原虫具有强大快速的杀伤作用。研究发现,除了具有抗疟疾、抗炎症、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗糖尿病等功效外,DHA对肺癌、肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、结直肠癌、头颈部鳞状细胞癌等不同类型的肿瘤细胞和动物模型肿瘤有一定的抑制作用。近年来研究发现DHA在抗肿瘤作用方面具有毒副作用小、多靶点、优先选择肿瘤细胞等优点,但是DHA单独用药处理在很多肿瘤类型中抑制肿瘤生长效果有限,联合用药治疗NSCLC似乎是一个更有前景的方案。ABT-263（Navitoclax）是针对于Bcl-2家族抗凋亡蛋... 

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要 Abstract 英文缩略词表 第1章 引言
1.1 肺癌及其治疗现状
    1.1.1 肺癌发生及分类
    1.1.2 肺癌的治疗
    1.1.3 靶向药物
1.2 双氢青蒿素概述
    1.2.1 双氢青蒿素简介
    1.2.2 双氢青蒿素抗肿瘤作用
1.3 信号转导及转录激活因子3(STAT3)与肿瘤发生
    1.3.1 JAK2-STAT3信号通路
    1.3.2 STAT3与肿瘤发生 第2章 课题立论依据、技术路线、研究意义
立论依据
技术路线
研究意义 第3章 双氢青蒿素协同增强ABT-263抗肿瘤作用
3.1 引言
3.2 实验材料
    3.2.1 细胞来源与细胞培养
    3.2.2 试剂与配置
    3.2.3 主要仪器设备
3.3 实验方法
    3.3.1 细胞凋亡测定
    3.3.2 高内涵成像及细胞生长率测定
    3.3.3 协同指数的测定
    3.3.4 克隆形成实验
    3.3.5 免疫印迹检测蛋白表达水平
    3.3.6 慢病毒包装
    3.3.7 sh-ctrl、sh-Bax稳转细胞系的构建
    3.3.8 数据分析
3.4 实验结果
    3.4.1 高内涵观察DHA、ABT或Comb处理下细胞生长情况
    3.4.2 DHA、ABT双药处理的时间、剂量效应探究
    3.4.3 DHA、ABT双药联合具有协同作用
    3.4.4 双药联合显著抑制细胞生长
    3.4.5 DHA、ABT双药联合在EGFR或Ras突变的NSCLC中显著引起凋亡
    3.4.6 蛋白免疫印迹结果显示双药联合上调凋亡相关蛋白表达
    3.4.7 敲低Bax显著保护了双药引起的凋亡
3.5 小结与讨论 第4章 DHA协同增强ABT-263引起细胞凋亡的分子机制探究
4.1 引言
4.2 材料
    4.2.1 细胞来源与细胞培养
    4.2.2 试剂与配制
    4.2.3 主要仪器设备(同3.2.3)
4.3 实验方法
    4.3.1 A549细胞瞬时转染pCDNA3.1-survivin
    4.3.2 蛋白免疫印迹、流式技术检测细胞凋亡、结果统计(同3.2)
4.4 结果
    4.4.1 蛋白免疫印迹检测Mcl-1在DHA处理后的表达水平
    4.4.2 基因敲减Mcl-1后ABT、Comb处理后细胞死亡率上升
    4.4.3 免疫印迹筛选抗凋亡和促凋亡蛋白成员及其表达变化
    4.4.4 持续激活Survivin后细胞死亡率下降
    4.4.5 敲低Bim后细胞死亡率下降
4.5 小结与讨论 第5章 STAT3功能缺失促进ABT-263引起细胞凋亡
5.1 引言
5.2 材料
    5.2.1 细胞来源与细胞培养(同3.2.1)
    5.2.2 试剂与配制
    5.2.3 主要仪器设备(同3.2.3)
5.3 方法
    5.3.1 蛋白质磷酸化激酶芯片
    5.3.2 免疫印迹检测相关蛋白表达水平(同3.3.5)
    5.3.3 数据分析
5.4 结果
    5.4.1 蛋白激酶芯片结果显示DHA显著抑制STAT3的活化磷酸化
    5.4.2 DHA抑制p-STAT3具有时间和剂量依赖效应
    5.4.3 其他相关蛋白激酶在双药联合中的作用
5.5 小结与讨论 第6章 DHA通过抑制JAK2/STAT3下调Mcl-1、Survivin的表达增强ABT-263诱导的细胞凋亡
6.1 引言
6.2 实验材料、试剂及仪器设备
    6.2.1 细胞来源及细胞培养(同3.2.1)
    6.2.2 实验试剂及配置
    6.2.3 主要仪器设备
6.3 实验方法
    6.3.1 免疫印迹实验方法(同3.3.5)
    6.3.2 慢病毒包装实验方法(同3.2.6)
    6.3.3 克隆形成实验方法(同3.3.4)
    6.3.4 双荧光素酶报告基因检测STAT3转录活性
    6.3.5 实时定量PCR实验方法
    6.3.6 pGreen-STAT3质粒构建
6.4 实验结果
    6.4.1 STAT3功能缺失后显著增强ABT-263的细胞毒性
    6.4.2 STAT3功能增益后保护了联合用药引起的细胞凋亡
    6.4.3 敲低、过表达STAT3后克隆形成数变化
    6.4.4 JAK2是STAT3的上游分子
    6.4.5 Mcl-1、Survivin与STAT3变化呈正相关
    6.4.6 DHA抑制STAT3的转录活性
    6.4.7 DHA在转录水平抑制Mcl-1、Survivin的表达
6.5 小结与讨论 第7章 DHA、ABT-263在体内的抗肿瘤作用及机制研究
7.1 引言
7.2 材料
    7.2.1 细胞来源与裸鼠来源
    7.2.2 试剂与配制
    7.2.3 实验分组
7.3 方法
    7.3.1 裸鼠肿瘤模型构建
    7.3.2 裸鼠灌胃
    7.3.3 免疫印迹
    7.3.4 数据统计
7.4 结果
    7.4.1 双药联合抑制小鼠体内肿瘤生长
    7.4.2 双药联合抑制肿瘤生长的分子机制探究
7.5 小节与讨论 第8章 总结 参考文献 致谢 攻读硕士学位期间研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Artemisinin-Second Career as Anticancer Drug?[J]. Thomas Efferth.  World Journal of Traditional Chinese Medicine. 2015(04)
[2]Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较[J]. 张伟,梁智辉.  细胞与分子免疫学杂志. 2014(11)



本文编号：3668743