自噬在PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235引起骨肉瘤细胞毒性作用中的研究

发布时间：2022-09-27 16:39

　　磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/m TOR）是肿瘤细胞存活及凋亡重要的信号通路,骨肉瘤以及许多其它人类癌症出现PI3K/Akt/m TOR信号通路失调。NVP-BEZ235,作为一种新的PI3K/m TOR双重抑制剂,表现出良好的抗肿瘤活性。自噬是一种细胞溶酶体降解途径,在维持细胞内稳态、调节细胞存活和死亡方面至关重要。然而,PI3K/AKT/m TOR信号还可以负调控自噬过程,抑制细胞自噬的发生,而自噬可能保护凋亡,可减少化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡,抑制自噬可能提高NVP-BEZ235诱导的细胞凋亡。因此在本研究中,我们考察了自噬在NVP-BEZ235引起骨肉瘤细胞凋亡过程中的作用,并探讨了相关分子机制。方法:（1）MTT方法检测NVP-BEZ235和（或）自噬抑制剂3-MA对U2OS骨肉瘤细胞存活率的影响。（2）免疫印迹（western blot）的方法检测PI3K/AKT/m TOR信号通路蛋白相关蛋白（AKT和p70S6K）、凋亡通路相关蛋白（Cytochrome C、caspase-3和PARP）以及自噬相关蛋白（LC3,Beclin... 

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

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前言
中文摘要
Abstract
主要英文缩写词表
第1章 文献综述
    1.1 骨肉瘤的发病机制及治疗进展
        1.1.1 发病机制
        1.1.2 目前的治疗方法
        1.1.3 新兴的治疗方法和新的治疗靶点
    1.2 PI3K/AKT/m TOR信号通路与肿瘤
        1.2.1 PI3K/AKT/m TOR信号通路
        1.2.2 癌细胞PI3K-Akt-m TOR通路失调
        1.2.3 在临床开发阶段的抑制剂
        1.2.4 PI3K、AKT、m TOR抑制剂在肿瘤临床应用中的问题
    1.3 自噬与肿瘤
        1.3.1 自噬的分子机制
        1.3.2 自噬过程
        1.3.3 自噬的调控
        1.3.4 自噬在肿瘤中作用
第2章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 骨肉瘤标本采集
        2.1.4 细胞
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的培养与传代
        2.2.2 MTT实验检测细胞活力
        2.2.3 Western blot方法检测蛋白表达
        2.2.4 Atg5 si RNA细胞转染试验
        2.2.5 线粒体膜电位分析
        2.2.6 细胞凋亡检测
        2.2.7 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 PI3K/AKT/m TOR信号通路蛋白在骨肉瘤组织和骨肉瘤瘤旁正常骨组织中表达差异
    3.2 NVP-BEZ235对U2OS细胞存活率的影响
    3.3 NVP-BEZ235对U2OS细胞凋亡的影响
        3.3.1 不同浓度NVP-BEZ235对U2OS细胞凋亡率的影响
        3.3.2 不同浓度NVP-BEZ235对U2OS细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响
        3.3.3 线粒体凋亡信号通路参与了NVP-BEZ235诱导的U2OS细胞凋亡
    3.4 NVP-BEZ235对U2OS细胞自噬相关蛋白LC3，Beclin 1 和p62表达水平的影响
        3.4.1 NVP-BEZ235对U2OS细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin表达水平的影响
        3.4.2 NVP-BEZ235对U2OS细胞p62表达水平的影响
    3.5 抑制自噬可以明显的增加NVP-BEZ235引起的细胞毒性
        3.5.1 ATG5 si RNA可以明显的增加NVP-BEZ235引起的细胞生存率的下降和凋亡
        3.5.2 自噬抑制剂可以增加NVP-BEZ235引起的细胞毒性
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3681222