ANGPTL3在结直肠癌进展中的作用及机制研究

发布时间：2022-10-10 20:38

　　背景:结直肠癌（colorectal cancer,CRC）发病率和死亡率的持续升高已经严重威胁到人类的健康和生命,但促使CRC进展的具体分子机制仍尚未明了。多项研究证实CRC的发生发展及转移符合肿瘤线性进展模型,提示CRC原发灶累积一系列基因突变以驱动肿瘤发生发展和转移。有学者通过生物信息数据库对比分析,发现CRC组织表达了“肝脏特异性”分泌蛋白—血管生成素样蛋白3（Angiopoietin-like proteins-3,ANGPTL3）。多项研究证实血管生成素样蛋白与多种恶性肿瘤的进展密切相关,我们据此推测ANGPTL3可能是CRC发生发展中累积突变之一,并参与和促进CRC恶性进展。目的:明确ANGPTL3在CRC组织标本及CRC细胞株的表达变化及其临床病理相关性;阐明ANGPTL3对CRC细胞株生物学行为的调控作用;探究ANGPTL3影响CRC生物学行为的具体分子机制,为临床CRC精准医疗或靶向治疗提供新的理论依据和分子靶点。方法:利用Oncomine肿瘤生物数据库通过生物信息分析,明确ANGPTL3在CRC及正常肠组织的表达差异;通过qRT-PCR和Western blot检... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词中英文注释表
第一章 绪论
    1.1 结直肠癌的流行病学
    1.2 结直肠癌的发生
    1.3 血管生成素样蛋白与肿瘤
    1.4 研究目的、意义、内容及实验设计方案
        1.4.1 研究目的和意义
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 实验设计方案
第二章 ANGPTL3 在结直肠癌的表达及临床病理相关性分析
    2.1 材料
        2.1.1 结直肠癌组织样本
        2.1.2 结直肠癌细胞株
        2.1.3 主要试剂及耗材
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 细胞复苏、细胞培养、细胞传代和冻存
        2.2.2 细胞及组织中RNA的提取
        2.2.3 细胞及组织中RNA的逆转录
        2.2.4 荧光定量PCR反应
        2.2.5 细胞及组织中蛋白的提取
        2.2.6 蛋白印迹
        2.2.7 免疫组化
        2.2.8 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 ANGPTL3 在结直肠癌组织的表达上调
        2.3.2 ANGPTL3 在结直肠癌细胞株的表达
        2.3.3 ANGPTL3 在结直肠癌的表达及临床病理相关性分析
    2.4 讨论
第三章 ANGPTL3 对结直肠癌细胞生物学行为的调控作用
    3.1 材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要试剂及耗材
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 细胞复苏、细胞培养、细胞传代和冻存
        3.2.2 细胞质粒转染
        3.2.3 CCK-8检测细胞增殖能力
        3.2.4 平板克隆形成实验
        3.2.5 Transwell细胞迁移实验
        3.2.6 划痕实验
        3.2.7 蛋白印迹
        3.2.8 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 过表达及干扰效率检测
        3.3.2 ANGPTL3 促进结直肠癌细胞体外增殖能力
        3.3.3 ANGPTL3 促进结直肠癌细胞的体外迁移能力
        3.3.4 ANGPTL3 促进肿瘤相关经典信号途径的活化
    3.4 讨论
第四章 ANGPTL3 影响结直肠癌生物学行为的分子机制
    4.1 材料
        4.1.1 细胞株
        4.1.2 主要试剂及耗材
        4.1.3 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 构建稳定敲减ANGPTL3的HCT116 细胞系
        4.2.2 转录本高通量测序
        4.2.3 分子生物学技术验证候选靶基因
        4.2.4 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 构建稳定干扰ANGPTL3 的结直肠癌细胞株
        4.3.2 基因差异表达分析
        4.3.3 差异基因富集分析
        4.3.4 筛选ANGPTL3 作用靶蛋白
        4.3.5 验证候选靶基因功能
    4.4 讨论
第五章 肿瘤动物模型验证ANGPTL3 对体内成瘤的影响
    5.1 材料
        5.1.1 细胞株
        5.1.2 实验动物
    5.2 方法
        5.2.1 构建细胞系肿瘤动物模型
        5.2.2 统计学分析
    5.3 结果
        5.3.1 ANGPTL3 可能通过MAPK14 促进了结直肠癌细胞的体内成瘤
    5.4 讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的科研成果及参加会议
    1.科研成果
    2.参加会议
    3.获奖情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌流行病学趋势[J]. 李道娟,李倩,贺宇彤.  肿瘤防治研究. 2015(03)
[2]夏威夷美籍日本人与日本本土人群结肠直肠癌的特征和存活率比较[J]. Sakamoto K.,Machi J.,Prygrocki M.,纪泛扑.  世界核心医学期刊文摘(胃肠病学分册). 2006(08)



本文编号：3690313