MiR-221-β-catenin/c-Jun反馈调节环路通过上皮间质转化调节胆管癌侵袭能力的研究

发布时间：2022-10-29 15:07

　　肝外胆管癌是一种发生于肝外胆道系统的恶性肿瘤,肝外胆管癌恶性程度高,容易发生侵袭转移,不容易诊断,难于治疗,对放化疗不敏感是其主要临床特征。先天性胆管囊肿、原发性硬化性胆管炎和胆石症等是肝外胆管癌的主要诱发因素。在全球范围内,胆管癌的发病率有逐渐上升趋势,虽然近年来肝外胆管癌在诊断和治疗等方面的研究有一定突破,但进展缓慢,胆管癌的发生发展以及侵袭转移具体机制仍不明确,仍然缺少对肝外胆管癌有效的诊断和治疗靶点。因此,进一步寻找生物靶标,将对肝外胆管癌的诊断和治疗以及患者预后的判断带来深远的影响。最近,针对microRNA与肿瘤的关系研究逐渐增多,成为科研热点难点。miRNAs是一种RNA,它们具有重要功能,却不编码蛋白质,约21-25nt大小的单链。microRNA具有特殊特异性结合靶基因来调控其表达。microRNA的异常表达不仅参与调解正常人体的多种生物学功能,目前研究发现miRNAs还与肿瘤的发生、发展密切相关,甚至参与调解恶性肿瘤的侵袭转移进程。在不同的肿瘤类型中,不同种类的microRNA呈现抑癌基因和癌基因的不同角色。其主要的作用机制包括:表观遗传水平改变,microRNA位... 

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
abstract
英文缩略词
文献综述
第1章 miR-221以及PTEN在肝外胆管癌组织、细胞系中的表达情况和二者关系的研究,并深入探讨二者在肝外胆管癌发生、发展、侵袭转移中的作用机制
    前言
    第1节 miR-221及其下游基因PTEN、β-catenin、c-Jun在肝外胆管癌组织和细胞系中的表达情况
        材料和方法
            1 研究对象
                1.1 肝外胆管癌及癌旁组织标本
                1.2 细胞系
            2 仪器设备与实验试剂
                2.1 主要实验仪器
                2.2 主要试剂与耗材
            3 实验方法
                3.1 主要溶液的配制
                3.2 细胞培养
                3.3 细胞复苏
                3.4 细胞冻存
                3.5 PCR引物设计合成
                3.6 miR-221mimics和miR-221反义核酸的合成
                3.7 RNA的提取及逆转录
                3.8 瞬时转染miR-221的成熟体(mimics)和抑制子(inhibitor)
                3.9 荧光素酶实验报告基因活性测定
                3.10 蛋白免疫印迹分析(westernBlot)
                3.11 统计学方法
        结果
            1 肝外胆管癌组织、癌旁组织以及胆管癌细胞系中miR-221的表达水平
                1.1 肝外胆管癌组织和癌旁组织组中miR-221表达水平的比较
                1.2 正常胆管上皮细胞以及胆管癌细胞系中miR-221表达水平的比较
            2 肝外胆管癌组织、癌旁组织中PTEN、β-catenin、c-Jun的表达水平及其与miR-221的关系
                2.1 肝外胆管癌组织和癌旁组织组中PTEN、β-catenin、c-Jun表达水平的比较
                2.2 肝外胆管癌中miR-221表达水平与PTEN的关系
                2.3 肝外胆管癌中miR-221表达水平与患者预后明显相关,是肝外胆管癌的独立预后因素
    第2节 miR-221在肝外胆管癌细胞系中靶向调控下游基因PTEN
        材料和方法
            1 研究对象
            2 仪器设备与实验试剂
                2.1 主要实验仪器
                2.2 主要试剂与耗材
            3 实验方法
                3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养
                3.2 质粒重组、转化、抽提和鉴定
                3.4 突变质粒的合成、转化和鉴定
                3.5 质粒的转染
                3.6 荧光素酶报告实验
                3.7 总RNA的提取以及脂质体转染后细胞系中miR-221表达水平的检测
                3.8 总蛋白的提取和蛋白质的浓度测定
                3.9 WesternBlot检测PTEN蛋白的表达情况
                3.10 统计学方法
        实验结果
            1 基因软件预测miR-221下游靶基因
            2 qRT-PCR检测miR-221inhibitor转染后miR-221在胆管癌细胞系中表达情况
            3 双荧光素酶报告实验验证PTEN是miR-221的下游靶基因之一
            4 抑制miR-221表达对肝外胆管癌细胞系中PTEN蛋白表达的影响
    第3节 miR-221通过抑制PTEN表达诱导肝外胆管癌细胞上皮间质转化,促进肝外胆管癌侵袭转移
        材料和方法
            1 研究对象
            2 实验仪器与试剂
                2.1 主要实验仪器
                2.2 主要试剂与耗材
            3 实验方法
                3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养
                3.2 miR-221inhibitor的转染
                3.3 蛋白质的提取
                3.4 westernblot检测相关蛋白质的表达情况
                3.5 miR-221对胆管癌细胞侵袭能力的影响
                3.6 统计学方法
        结果
            1 miR-221直接抑制PTEN表达促进肝外胆管癌侵袭转移
            2 miR-221直接抑制PTEN表达促进肝外胆管上皮间质转化
    讨论
第2章 β-catenin/c-Jun通路在miR-221调节肝外胆管癌侵袭转移过程中发挥作用的研究
    前言
    第1节 β-catenin/c-Jun信号通路参与miR-221诱导肝外胆管癌细胞上皮间质转化,促进肝外胆管癌侵袭转移
        材料和方法
            1 研究对象
            2 实验仪器与试剂
            3 实验方法
                3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养
                3.2 miR-221inhibitor的转染
                3.3 蛋白质的提取
                3.4 western blot检测相关蛋白质的表达情况
                3.5 miR-221对胆管癌细胞侵袭能力的影响
                3.6 统计学方法
        结果
            1 miR-221激活β-catenin/c-Jun信号通路促进肝外胆管癌侵袭转移
            2 β-catenin/c-Jun信号通路参与miR-221诱导肝外胆管癌细胞上皮间质转化,促进肝外胆管癌侵袭转移
    第2节 β-catenin/c-Jun信号通路促进miR-221的表达
        材料和方法
            1 研究对象
            2 实验仪器与试剂
                2.1 主要实验仪器
                2.2 主要试剂与耗材
            3 实验方法
                3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养
                3.2 蛋白质的提取
                3.3 western blot检测相关蛋白质的表达情况
                3.4 qRT-PCR检测miR-221表达
                3.5 统计学方法
        实验结果
            1 sic-Jun使c-Jun蛋白表达降低,BIO激活c-Jun表达
            2 β-catenin/c-Jun信号转导通路促进miR-221的表达
    讨论
第3章 结论
参考文献
个人简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]肝门部胆管癌中CD133的表达及RNA干扰抑制对胆管癌细胞增殖的影响[J]. 张升涛,刘斌,常琦,姬乐,王加中.  医学研究生学报. 2016(11)
[3]microRNA-21在胆管癌发生发展中的研究进展[J]. 李黑黑,刘建生.  中华消化外科杂志. 2016 (07)
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[5]Cholangiocarcinoma:A compact review of the literature[J]. Yucel Ustundag,Yusuf Bayraktar.  World Journal of Gastroenterology. 2008(42)
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本文编号：3697912