长链非编码RNA LINC01207竞争性结合miR-143-5p调控AGR2影响胰腺癌细胞自噬与凋亡的机制研究

发布时间：2022-11-07 17:12

　　目的:胰腺癌是一种恶性程度极高,早期筛查与诊断以及治疗都很有难度的消化道恶性肿瘤。胰腺癌的不良预后与其特殊的解剖位置、发病隐匿、缺乏早期特殊症状以及缺少有效的早期诊疗手段有着密切联系。超过80%的患者在确诊为胰腺癌时已经发生转移或处于进展期而无法接受手术切除,因此只能采取包括化疗、放疗及营养支持等综合治疗。然而,综合治疗对这部分患者的生存率并没有较好的改善,总体5年生存率仅为5%左右。即使是手术治疗的患者,其5年生存率也低于20%。为改善胰腺癌患者的预后差的情况,挖掘新的肿瘤生物标志物以及寻找有意义的分子治疗靶点成为目前研究的热点。以往的研究证据表明,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）可以在表观遗传水平上调节基因表达,并在调节癌细胞行为（包括增殖、侵袭、凋亡和转移等）发挥关键作用。大量的研究证实,lncRNA可以同通过结合特定的microRNA（miRNA）来激活靶基因表达,影响肿瘤的恶性生物学行为。AGR2是与多种肿瘤的转移、浸润、增殖及耐药相关的重要基因,被认为是早期检测和治疗的一个有前景的标志。因此,AGR2在胰腺癌中的功能及其在信号转导过程... 

【文章页数】：80 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :LINC01207 通过结合miR-326-3p靶向调控AGR2在胰腺癌中的表达
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 检索GEO数据库
            2.3.2 免疫组织化学法
            2.3.3 胰腺癌及癌旁组织总RNA提取
            2.3.4 样品cDNA合成
            2.3.5 qRT-PCR反应
            2.3.6 细胞培养
            2.3.7 培养细胞总RNA提取
            2.3.8 琼脂糖凝胶电泳
            2.3.9 细胞总蛋白提取
            2.3.10 BCA法测定蛋白浓度
            2.3.11 Western blot
            2.3.12 双荧光素酶报告基因实验
            2.3.13 细胞转染
            2.3.14 RNA pull down
            2.3.15 RIP实验
            2.3.16 统计学分析
    3 结果
        3.1 GEO数据库筛选结果
        3.2 胰腺癌和癌旁组织中LINC01207、miR-143-5p和 AGR2 的表达
            3.2.1 胰腺癌和癌旁组织中AGR2的表达
            3.2.2 胰腺癌和癌旁组织中LINC01207、miR-143-5p和 AGR2 的表达
        3.3 RT-PCR和 Western Blot筛选AGR2 高表达细胞系
        3.4 miR-143-5p可与LINC01207和AGR2 特异性结合
            3.4.1 RNA22 网站预测miR-143-5p与 LINC01207和AGR2 存在结合位点
            3.4.2 双荧光素酶报告基因验证miR-143-5p与 LINC01207和AGR2 靶向关系
            3.4.3 RNA pull-down和 RIP实验验证miR-143-5p与 LINC01207 特异性结合
        3.5 qRT-PCR检测细胞转染后LINC01207、miR-143-5p和 AGR2 的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :LINC01207 通过调控miR-143-5p/AGR2 通路对胰腺癌细胞自噬与凋亡的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 细胞转染
            2.3.3 MTT法检测细胞增殖
            2.3.4 TUNEL法检测细胞凋亡情况
            2.3.5 流式细胞术检测细胞凋亡
            2.3.6 吖啶橙染色检测自噬酸性囊泡
            2.3.7 免疫荧光检测LC3Ⅱ表达
            2.3.8 BCA法测定蛋白浓度
            2.3.9 Western blot
            2.3.10 统计学分析
    3 结果
        3.1 沉默LINC01207 和过表达miR-143-5p抑制胰腺癌细胞生长
        3.2 沉默LINC01207 和过表达miR-143-5p促进胰腺癌细胞凋亡
            3.2.1 TUNEL法检测LINC01207和miR-143-5P对胰腺癌细胞凋亡的影响
            3.2.2 流式细胞术检测LINC01207和miR-143-5P对胰腺癌细胞凋亡的影响
        3.3 沉默LINC01207 和过表达miR-143-5p促进胰腺癌细胞自噬
            3.3.1 吖啶橙检测LINC01207和miR-143-5P对胰腺癌细胞自噬的影响
            3.3.2 免疫荧光检测LINC01207和miR-143-5P对自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响
        3.4 LINC01207 通过结合miR-143-5p调控AGR2 影响自噬与凋亡相关蛋白的表达
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Circular RNA ciRS-7 promotes the proliferation and metastasis of pancreatic cancer by regulating miR-7-mediated EGFR/STAT3 signaling pathway[J]. Lei Liu,Fu-Bao Liu,Mei Huang,Kun Xie,Qing-Song Xie,Chen-Hai Liu,Min-Jing Shen,Qiang Huang.  Hepatobiliary ＆ Pancreatic Diseases International. 2019(06)
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本文编号：3704076