Rab5a通过上调Cdc42影响肝癌细胞迁移和侵袭

发布时间：2022-12-11 08:08

　　目的探讨Rab5a与肝细胞癌发生发展之间的联系,揭示Rab5a促进肝癌细胞迁移和侵袭的新机制,为临床治疗肝细胞癌提供依据。方法1.用免疫组化方法和q RT-PCR检测人肝癌组织及癌旁组织中Rab5a的表达水平。2.用q RT-PCR和Western blotting方法检测肝癌细胞系中Rab5a的表达量。3.构建Rab5a表达质粒（p CMV-Sport6-Rab5a）,合成干扰片段（si-Rab5a）。在SK-Hep1和SMMC7721细胞系中用qRT-PCR和Western blot方法检测过表达和siRNA效率。4.transwell实验和伤口划痕实验,在HepG2和SK-Hep1细胞中分别转染pCMV-Sport6-Rab5a（pCMV-Sport6作为对照）和siRab5a（Si-NC作为对照）,检测细胞的转移能力。5.在SK-Hep1细胞中转染p CMV-Sport6-Rab5a和si-Rab5a,用q RT-PCR和Western blotting方法检测与转移相关的基因,如:FOXC2,TP53,VEGF,MMp2,Cdc42等的表达情况。6.构建含有Cdc42基因启动... 

【文章页数】：77 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
符号说明
中文摘要
英文摘要
前言
    参考文献
第一部分 Rab5a在肝癌组织和肝癌细胞中表达分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 肝癌细胞系以及肝癌组织病理切片
            1.1.2 试剂
            1.1.3 主要仪器及设备
        1.2 方法
            1.2.1 细胞复苏、细胞传代和细胞换液
            1.2.2 免疫组化、qRT-PCR、蛋白提取和Western Blot
    2 结果
        2.1 肝癌组织中Rab5a高表达量
        2.2 肝癌细胞中Rab5a的表达量呈上调趋势
    3 讨论
第二部分 Rab5a在肝癌发生发展中的功能研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 肝癌细胞系
            1.1.2 质粒载体、干扰RNA及细菌感受态
            1.1.3 主要仪器及设备
        1.2 方法
            1.2.1 构建Rab5a过表达质粒
            1.2.2 转染质粒
            1.2.3 RNA提取
            1.2.4 细胞功能实验
    2 结果
        2.1 构建Rab5a过表达质粒
        2.2 检测Rab5a过表达和干扰效果
        2.3 Rab5a对肝癌细胞迁移、侵袭能力影响的检测
    3 讨论
第三部分 阐明Raba5在肝癌发生发展中的作用机制
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞系
            1.1.2 转染质粒、慢病毒及293T细胞株
        1.2 方法
            1.2.1 qRT-PCR
            1.2.2 Western Blot
            1.2.3 双荧光素酶活性测定
    2 结果
        2.1 qRT-PCR筛选预测靶基因
        2.2 检测Rab5a对靶基因蛋白质水平的影响
        2.3 双荧光素报告基因实验检测Rab5a启动子活性
    3 讨论
第四部分 动物模型中验证Rab5a对肝癌进展的影响
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞系和裸鼠
            1.1.2 慢病毒质粒
        1.2 方法
            1.2.1 Rab5a慢病毒过表达质粒建构
            1.2.2 构建慢病毒介导的Rab5a稳定表达肝癌细胞系
            1.2.3 裸鼠异位移植瘤实验
    2 结果
        2.1 验证Rab5a稳定过表达细胞系是否构建成功
        2.2 裸鼠异位移植瘤模型构建成功
    3 讨论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
博士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Differential expression of Rab27A/B correlates with clinical outcome in hepatocellular carcinoma[J]. Wei-Wei Dong,Wen-Hua Xiao,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,the General Hospital of Chinese People’s Liberation Army,Beijing 100048,China Quan Mou,Jian Chen,Department of surgery,252 Hospital of Chinese People’s Liberation Army,Baoding 071000,Hebei Province,China Jian-Tao Cui,Wen-Mei Li,Laboratory of Molecular Oncology,Peking University Cancer Hospital/Institute,Beijing 100142,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(15)



本文编号：3718430