肝癌细胞谷氨酰胺剥夺诱导血管生成的机理研究

发布时间：2023-01-07 10:02

　　研究背景:肝癌是全世界常见的消化系统恶性肿瘤之一。肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是由肝细胞癌变引起的一种原发性肝脏癌症,它在原发性肝癌的组织学类型中占了很大的比重,约为90%以上,是世界上最流行的癌症之一。HCC的发病率和死亡率在近几年全世界地区,包括中欧、拉丁美洲和北美都在增加,其发病率在全球恶性肿瘤中排在第五位,仅次于肺癌、乳腺癌、直结肠癌和胃癌,其致死率在恶性肿瘤中排在第三位。HCC的发生发展是一个很复杂的过程,其发病比较隐匿,发现时大多都已是中晚期,侵袭性强,大多数已经发生了扩散转移,且转移速度很快,死亡率极高,术后极易复发。谷氨酰胺（glutamine,Gln）是人类及哺乳动物血浆中含量最丰富且最重要的一种游离氨基酸,它既是正常分化的细胞所需要的能源物质,也是肿瘤细胞的重要能源物质。研究表明Gln在肝癌细胞的增殖、侵袭、转移等过程中发挥了重要的作用,因此我们研究了Gln剥夺对肝癌细胞的影响,以及Gln剥夺能否指导肝癌的临床治疗。研究材料和方法:本研究采用了DMEM培养液和无Gln的DMEM培养液来研究Gln剥夺对HCC活力、迁移和血管生... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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中英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 肝癌的研究现状
        1.1.1 肝癌的介绍
        1.1.2 肝癌的危险因素
        1.1.3 肝癌的治疗
    1.2 谷氨酰胺及其生物学功能
        1.2.1 谷氨酰胺的生物学功能
        1.2.2 谷氨酰胺的代谢
        1.2.3 谷氨酰胺代谢调控的相关基因
    1.3 谷氨酰胺与肿瘤
        1.3.1 谷氨酰胺酶与肿瘤
        1.3.2 谷氨酰胺在肿瘤中的代谢
        1.3.3 谷氨酰胺与肿瘤治疗
第2章 肝癌细胞谷氨酰胺剥夺诱导血管生成的研究
    2.1 实验仪器和材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂和耗材
        2.1.3 主要试剂配制
        2.1.4 细胞来源
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的传代、冻存、复苏
        2.2.2 MTT法
        2.2.3 克隆形成实验
        2.2.4 划痕实验
        2.2.5 Transwell实验
        2.2.6 血管形成实验
    2.3 数据处理
    2.4 实验结果
        2.4.1 谷氨酰胺剥夺降低肝癌细胞HepG2和HCCC-9810的活力
        2.4.2 谷氨酰胺剥夺促进肝癌细胞HepG2和HCCC-9810的迁移
        2.4.3 谷氨酰胺剥夺促进肝癌细胞HepG2和HCCC-9810的侵袭
        2.4.4 无谷氨酰胺的条件培养液能够增加人脐静脉内皮细胞HUVEC的活力
        2.4.5 无谷氨酰胺的条件培养液能够促进人脐静脉内皮细胞HUVEC的血管生成
    2.5 讨论
第3章 谷氨酰胺剥夺诱导血管生成的机理研究
    3.1 实验仪器和材料
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 主要试剂和耗材
        3.1.3 主要试剂配制
        3.1.4 细胞来源
    3.2 实验方法
        3.2.1 ELISA实验
        3.2.2 qRT-PCR
        3.2.3 WesternBlot
        3.2.4 果糖-6-磷酸激酶(PFK)活性测定
        3.2.5 乳酸脱氢酶(LDH)活性测定
        3.2.6 己糖激酶(HK)活性测定
    3.3 数据处理
    3.4 实验结果
        3.4.1 谷氨酰胺剥夺能够使肝癌细胞HepG2和HCCC-9810VEGF的水平升高
        3.4.2 谷氨酰胺剥夺能够促进肝癌细胞HepG2和HCCC-9810中HIF-1α和VEGF的mRNA的表达
        3.4.3 谷氨酰胺剥夺能够促进肝癌细胞HepG2和HCCC-9810中HIF-1α和VEGF的蛋白表达
        3.4.4 谷氨酰胺剥夺能够促进肝癌细胞HepG2和HCCC-9810中PI3K、AKT蛋白表达
        3.4.5 谷氨酰胺剥夺能够促进肝癌细胞HepG2和HCCC-9810中糖酵解相关酶的mRNA表达
        3.4.6 谷氨酰胺剥夺能够提高肝癌细胞HepG2和HCCC-9810中糖酵解相关酶的活力
        3.4.7 谷氨酰胺剥夺时抑制糖酵解会抑制血管生成
    3.5 讨论
第4章 结论
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]谷氨酰胺酶与肿瘤的关系研究进展[J]. 黎兵华,丁义涛,余德才.  转化医学电子杂志. 2017(12)
[2]谷氨酰胺代谢在消化系统肿瘤中的研究进展[J]. 张雪,文国容,金海,庹必光.  医学综述. 2017(22)
[3]脂肪细胞谷氨酰胺合成酶抑制结肠癌细胞的腹腔转移及血管生成[J]. 陈晓珍,李一飞,张璇,缪洪明,梁后杰.  第三军医大学学报. 2018(01)
[4]原发性肝癌诊疗规范（2017年版）[J].   传染病信息. 2017(03)
[5]射频消融在原发性肝癌治疗中的应用进展[J]. 吴垒,孟弘婧,董胜利.  中国现代医生. 2017(06)
[6]柠檬酸钠促胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及机制研究[J]. 郭兴裕,王婷安,张晓东,冼书林,陆云飞.  中国普通外科杂志. 2016(04)
[7]靶向内皮细胞糖酵解限速酶PFKFB3的抗肿瘤血管生成研究进展[J]. 刘飞飞,刘静,吴谓,刘颖,罗瑛,张继虹.  肿瘤. 2016(01)
[8]肿瘤治疗的新标靶——谷氨酰胺依赖[J]. 向敏,高振宇.  海峡药学. 2015(09)
[9]谷氨酰胺对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠道组织血管内皮生长因子表达的影响[J]. 林梅芳,文革生,贺湘英,黄永坤,袁新华,邓庆先,富琴琴,蒋琦.  中国新生儿科杂志. 2015(05)
[10]慢性乙型肝炎肝硬化患者发生肝细胞癌的危险因素分析[J]. 张原青,彭利军,曹忆嵘,曾志萍,吴玉婧,石虹,陈世耀,郭津生.  中华肝脏病杂志. 2015 (07)

博士论文
[1]抗能量药物柠檬酸钠对胃癌细胞增殖的影响及其作用机制研究[D]. 冼书林.广西医科大学 2014
[2]谷氨酰胺对阻塞性黄疸大鼠免疫功能、肠道细菌移位、肝组织细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax的表达影响[D]. 程雷.吉林大学 2004

硕士论文
[1]谷氨酰胺对断奶仔猪免疫应激调节作用及其分子机制的研究[D]. 王丽.沈阳农业大学 2017
[2]去甲肾上腺素介导的β-肾上腺素能受体活化通过激活ERK1/2/CREB和PI3K/PDK1/AKT信号通路促进肝癌细胞增殖[D]. 何晶晶.南昌大学 2017
[3]接头蛋白Gab1通过PI3K-AKT信号通路调节bFGF诱导的血管生成[D]. 李文献.福建医科大学 2015



本文编号：3728428