Cathepsin K在非小细胞肺癌中的潜在作用及机制研究

发布时间：2023-02-07 15:01

　　背景:肺癌是肺部最常见的原发性恶性肿瘤,因其发病率高、发现晚、预后差,成为死亡率增长最快,对人类生命健康构成最大威胁的恶性肿瘤之一。其中,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌类型,占肺癌的80%-85%。在过去的几年,免疫疗法的使用显著的提高了NSCLC患者的存活率,然而,NSCLC的总体治愈率和存活率仍然非常低,特别是对于那些在转移性疾病阶段的患者。因此靶向减弱NSCLC的转移,抑制其发展成为临床治疗的重要举措。Cathepsin K是属于木瓜蛋白酶家族的半胱氨酸蛋白酶,主要存在于溶酶体中,是哺乳动物体内最有活性的蛋白水解酶。Cathepsin K与人类多种疾病相关,在骨质疏松中研究得较为透彻,此外密切关联肿瘤的发生与发展。有研究表明Cathepsin K与肺癌术后存活率具有显著相关性,但其在NSCLC中的具体作用研究尚少,因此通过探索Cathepsin K对NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制,以期为NSCLC的靶向医治提供参考。方法:1.培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,人NSCLC细胞A549、H1299,提取...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 肺癌概述
        1.1.1 肺癌危害
        1.1.2 肺癌病因
        1.1.3 肺癌治疗方法
    1.2 Cathepsin K概述
        1.2.1 Cathepsin K家族
        1.2.2 Cathepsin K简述
        1.2.3 Cathepsin K与癌症
    1.3 研究目的和意义
第二章 实验材料、仪器和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞和质粒
        2.1.2 主要试剂
    2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养实验
        2.3.2 细胞总RNA提取实验
        2.3.3 cDNA的合成实验
        2.3.4 实时荧光定量PCR实验
        2.3.5 转化克隆实验
        2.3.6 去内毒素质粒DNA提取实验
        2.3.7 细胞转染实验
        2.3.8 蛋白提取实验
        2.3.9 BCA蛋白定量实验
        2.3.10 蛋白免疫印迹实验
        2.3.11 免疫荧光实验
        2.3.12 细胞增殖能力检测实验
        2.3.13 细胞迁移能力检测实验
        2.3.14 细胞侵袭能力检测实验
        2.3.15 统计分析
第三章 实验结果与讨论
    3.1 提取总RNA浓度、纯度及完整性检测
        3.1.1 提取总RNA浓度和纯度的检测
        3.1.2 提取总RNA完整性的检测
    3.2 细胞形貌示意图
    3.3 MRC-5、A549和H1299中Cathepsin K的差异性表达
    3.4 MRC-5、A549细胞中Cathepsin K细胞定位及表达
    3.5 重组质粒的检测
    3.6 Cathepsin K过表达模型构建
    3.7 Cathepsin K沉默模型构建
    3.8 细胞行为功能学检测
        3.8.1 细胞增殖
        3.8.2 细胞迁移
        3.8.3 细胞侵袭
    3.9 mTOR信号通路检测
    3.10 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3737038