CircITGA7在人结直肠癌生长及转移中的作用和分子机制研究

发布时间：2023-02-18 21:36

　　研究背景和目的环状RNA在多种肿瘤中存在异常表达,然而环状RNA在肿瘤中的功能和机制大部分仍然是未知的。本课题阐明一个新发现的环状RNA circITGA7在人结直肠癌中的表达、功能及分子机制,并初步探索其表达调控机制。研究方法通过PCR扩增、Sanger测序、RNA酶R消化及放线菌素D处理等方法对circITGA7进行鉴定。应用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测circITGA7在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株中的表达,分析circITGA7表达与临床病理参数的关系。通过上调或干扰circITGA7在结直肠癌细胞中的表达,应用MTT、平板克隆形成、流式细胞术、划痕愈合、Transwell迁移及侵袭实验、裸鼠皮下瘤模型、脾脏注射肝转移模型及盲肠原位种植转移模型等观察circITGA7对结直肠癌细胞体内外生长及转移的影响。通过RNA-seq及western blot筛选circITGA7调控的肿瘤相关信号通路。利用荧光原位杂交(FISH)及RNA核浆分离技术明确circITGA7在细胞内的定位。应用生物信息学、双荧光素酶报告实验、western blot及免疫组织化学(IHC)等实验研究...

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一章 CircITGA7的鉴定及在结直肠癌中的表达
    一、材料及方法
        1. 材料
        2. 方法
    二、实验结果
        1. CircITGA7是ITGA7第4外显子通过背向剪切形成的环状RNA
        2. RNA酶R消化及放线菌素D处理验证circITGA7的稳定性
        3. CircITGA7在结直肠癌组织中表达降低
        4. CircITGA7在结直肠癌组织中的表达具有潜在的诊断价值
        5. CircITGA7在结直肠癌组织中的表达与患者临床病理特征的关系
        6. CircITGA7在结直肠癌细胞株中表达降低
    三、结论
    四、讨论
第二章 CircITGA7对结直肠癌细胞生长及转移的影响
    一、材料及方法
        1. 材料
        2. 方法
    二、实验结果
        1. CircITGA7过表达载体的构建及验证
        2. CircITGA7过表达慢病毒的制备及稳定过表达细胞株的筛选
        3. CircITGA7过表达对结直肠癌细胞体外增殖及迁移的影响
        4. CircITGA7过表达对结直肠癌细胞体内生长及转移的影响
        5. CircITGA7干扰片段的筛选及验证
        6. CircITGA7干扰慢病毒的制备及稳定干扰细胞株的筛选及验证
        7. 干扰circITGA7表达对结直肠癌细胞生长及迁移的影响
    三、结论
    四、讨论
第三章 CircITGA7调节结直肠癌细胞生长及转移的机制
    一、材料及方法
        1. 材料
        2. 方法
    二、实验结果
        1. RNA-seq及KEGG富集分析筛选circITGA7调控的信号通路
        2. Western blot验证circITGA7对Ras信号通路的调控
        3. FISH及RNA核浆分离技术检测circITGA7的亚细胞分布
        4. CircITGA7通过结合miRNA-370-3p上调NF1表达从而抑制Ras通路
        5. CircITGA7与蛋白结合的初步探索
    三、结论
    四、讨论
第四章 CircITGA7表达的上游调控机制的初步研究
    一、材料及方法
        1. 材料
        2. 方法
    二、实验结果
        1. ITGA7在结直肠癌组织中表达下调
        2. ITGA7基因的突变分析
        3. ITGA7启动子区甲基化检测
        4. 转录因子RREB1对ITGA7及circITGA7表达的影响
        5. CircITGA7上下游内含子序列对circITGA7表达的影响
    三、结论
    四、讨论
全文讨论
参考文献
英文缩写词注解
攻读博士学位期间成果
致谢



本文编号：3745581