蛋白4.1R通过下调M2型巨噬细胞分泌VEGFA抑制结肠癌的转移

发布时间：2023-02-21 20:10

　　研究背景结肠癌是发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤,是人类的一种高发性恶性肿瘤,其发病率一直呈上升趋势,在全球恶性肿瘤发病率中已上升至第三位,严重危害人类健康。肿瘤转移是晚期结肠癌患者死亡的主要原因之一,也是结肠癌临床治疗的难题。结肠癌转移是指结肠癌肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管、血管或其它途经转移到其它部位继续生长,形成与原发部位相同类型的肿瘤。结肠癌转移有四种途径,包括直接浸润、淋巴转移、血行转移和种植转移,淋巴转移是结肠癌转移的主要途径。结肠癌转移的具体机制目前仍不清楚,但有报道表明肿瘤微环境(TME)中M2型巨噬细胞对肿瘤的转移有促进作用。巨噬细胞起源于骨髓多能造血干细胞,是单核-巨噬细胞系统中具有吞噬功能的晚期分化细胞,也是构成机体固有免疫防线的重要部分,因其异质性、可塑性以及在维持机体稳态中的重要性而成为医学免疫学研究的重要内容。巨噬细胞按照其膜表面抗原和分泌的细胞因子类型可分为多种亚群,主要有经典活化的M1型巨噬细胞和替代性活化的M2型巨噬细胞。M1型巨噬细胞被认为具有促进炎症反应和抗肿瘤免疫功能,而M2型巨噬细胞则表现出抗炎和促进肿瘤进展等作用。肿瘤微环境中的巨噬细胞被称为肿...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
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第一章 引言
    1.1 结肠癌
    1.2 M2型巨噬细胞
    1.3 蛋白4.1R
    1.4 蛋白4.1R与M2型巨噬细胞
    1.5 研究目的与意义
    1.6 技术路线
第二章 骨髓来源M2型巨噬细胞的体外诱导与鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠骨髓来源M2型巨噬细胞的体外诱导培养
        2.2.2 流式细胞术检测BMDM和M2型巨噬细胞的纯度
        2.2.3 蛋白4.1R在M2-4.1R^+/+和M2-4.1R^-/-中的表达鉴定
    2.3 实验结果
        2.3.1 小鼠骨髓来源巨噬细胞的纯度检测
        2.3.2 小鼠骨髓来源M2型巨噬细胞的纯度检测
        2.3.3 蛋白4.1R在M2-4.1R^+/+和M2-4.1R^-/-中的表达情况
    2.4 讨论
第三章 蛋白4.1R基因敲除对M2型巨噬细胞吞噬作用和细胞因子分泌功能的影响
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 荧光微球法检测蛋白4.1R对M2型巨噬细胞吞噬作用的影响
        3.2.2 qRT-PCR法检测蛋白4.1R对 M2型巨噬细胞表达细胞因子的影响
        3.2.3 Western blot法检测蛋白4.1R对M2型巨噬细胞中VEGFA表达的影响
        3.2.4 ELISA法检测蛋白4.1R对 M2 型巨噬细胞分泌VEGFA的影响
        3.2.5 数据分析
    3.3 结果
        3.3.1 蛋白4.1R基因敲除对M2型巨噬细胞吞噬作用的影响
        3.3.2 qRT-PCR法检测蛋白4.1R基因敲除对M2 型巨噬细胞表达细胞因子的影响
        3.3.3 Western blot和 ELISA法检测蛋白4.1R基因敲除对M2 型巨噬细胞分泌VEGFA的影响
    3.4 讨论
第四章 蛋白4.1R基因敲除对M2型巨噬细胞促肿瘤效应的影响
    4.1 材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 细胞株
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器
        4.1.5 主要试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 共培养系统的建立
        4.2.3 划痕实验检测4.1R基因敲除对M2型巨噬细胞促进MC38细胞伤口愈合能力的影响
        4.2.4 Transwell实验检测4.1R基因敲除对M2 型巨噬细胞促进MC38 细胞迁移能力的影响
        4.2.5 Transwell实验检测4.1R基因敲除对M2 型巨噬细胞促进MC38 细胞侵袭能力的影响
        4.2.6 CCK-8 法检测4.1R基因敲除对M2 型巨噬细胞促进MC38 细胞增殖能力的影响
        4.2.7 Western blot法检测4.1R基因敲除对M2 型巨噬细胞促进MC38 细胞EMT过程的影响
        4.2.8 裸鼠皮下移植瘤模型检测4.1R基因敲除对M2型巨噬细胞促进MC38细胞肿瘤形成能力的影响
        4.2.9 数据分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 4.1R基因敲除对M2巨噬细胞促进MC38细胞伤口愈合能力的影响
        4.3.2 4.1R基因敲除对M2巨噬细胞促进MC38细胞迁移能力的影响
        4.3.3 4.1R基因敲除对M2巨噬细胞促进MC38细胞侵袭能力的影响
        4.3.4 4.1R基因敲除对M2巨噬细胞促进MC38细胞增殖能力的影响
        4.3.5 4.1R基因敲除对M2 巨噬细胞促进MC38 细胞EMT过程的影响
        4.3.6 4.1R基因敲除对M2巨噬细胞促进MC38细胞肿瘤形成能力的影响
    4.4 讨论
第五章 蛋白4.1R影响结肠癌细胞的转移和EMT过程机制探索
    5.1 材料
        5.1.1 细胞株
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 主要仪器
    5.2 方法
        5.2.1 Transwell检测抑制M2-4.1R^-/-与MC38 细胞共培养系统中的VEGFA活性或PI3K/Akt通路对MC38 细胞迁移、侵袭的影响
        5.2.2 Western blot检测4.1R基因敲除型M2 型巨噬细胞分泌VEGFA增加对MC38 细胞PI3K/Akt信号通路和EMT过程的影响
        5.2.3 数据分析
    5.3 结果
        5.3.1 4.1R基因敲除型M2 型巨噬细胞分泌VEGFA增加对MC38 细胞迁移、侵袭的影响
        5.3.2 4.1R基因敲除型M2 型巨噬细胞分泌VEGFA增加对MC38 细胞EMT过程的影响
        5.3.3 4.1R基因敲除型M2 型巨噬细胞分泌的VEGFA通过激活MC38 细胞PI3K/Akt信号通路促进其EMT过程
        5.3.4 4.1R基因敲除型M2 型巨噬细胞通过激活MC38 细胞PI3K/Akt信号通路促进其迁移和侵袭
    5.4 讨论
全文总结与讨论
参考文献
个人简历、在学期间发表的学术论文及成果
致谢



本文编号：3747937