TGF-β经典信号通路及相关基因调控非小细胞肺癌细胞上皮—间充质转化和侵袭转移机制研究

发布时间：2023-03-05 13:29

　　第一部分Ski抑制TGF-β/SMAD经典信号通路诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化和侵袭背景：上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是肿瘤转移过程中发生的一项关键事件。在此过程中,伴随着上皮细胞分子标志物E-cadherin的表达减少和间质细胞分子标记物N-cadherin的表达增多,肿瘤细胞向间充质细胞形态发生变化,能动性和侵袭能力显著增强,具有明显的间充质细胞的特性。在多种癌症中,TGF-p信号通路都是一个诱发EMT的关键因素。Ski是TGF-β信号通路的一个重要的负调控因子,其可以与SMAD蛋白相互作用来抑制TGF-β信号通路。尽管越来越多的研究证实Ski在人类多种癌症中扮演着癌基因或抑癌基因的双重角色,但是在非小细胞肺癌中,Ski能否影响TGF-β诱导的EMT和肿瘤细胞侵润及其分子机制还没有研究进行详细的阐述。方法：(1)检测Ski在不同非小细胞肺癌细胞株和组织中的表达；(2)构建Ski过表达和敲弱的A549稳转细胞株；(3)在稳转细胞株中外源加入TGF-β1,观察细胞形态,Western blot检测EMT分子标...

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 Ski基因抑制TGF-β/SMAD信号通路诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化和侵袭
    一 引言
    二、材料和方法
        (一) 材料
        (二) 方法和步骤
            (一) 细胞培养
            (二) Western Blot
            (三) Real Time PCR
            (四) PAI-1基因启动子区荧光素酶报告载体的构建及活性检测
            (五) Ski基因过表达慢病毒质粒的构建
            (六) Ski沉默的sh-Ski慢病毒表达质粒的构建
            (七) 慢病毒的包装,感染以及稳转细胞系的筛选
            (八) Transwell细胞侵袭实验
            (九) 肺癌组织样本中Ski的表达分析
            (十) 统计分析
    三 结果
        (一). Ski在非小细胞肺癌细胞株和非小细胞肺癌组织中的表达
        (二). Ski抑制TGF-β1诱导的EMT
        (三). Ski抑制TGF-β1驱动的转录应答
        (四). Ski抑制TGF-β1诱导的NSCLC细胞侵袭
        (五). p-SMAD3参与并影响TGF-β1诱导的EMT和细胞侵袭
        (六). Ski抑制TGF-β1诱导的EMT和细胞侵袭主要依赖于经典的SMAD通路
    四 讨论
    五. 参考文献
第二部分 非小细胞肺癌中TGF-β调控N-cadherin表达的分子机制研究
    一、前言
    二、材料和方法
        (一) 材料
        (二) 方法
    三 结果
        (一) 在NSCLC细胞中,TGF-β1能够显著上调N-cadheirn的表达
        (二) .CDH2基因启动子区存在着TGF-β的应答效应元件,该顺时作用元件参与并影响TGF-β对CDH2基因的表达调控
        (三) TGF-β激活的SMAD3/4转录复合体能够直接靶向结合到CDH2的启动子区并且影响其转录活性
        (四) 在NSCLC细胞中,SMAD3/4复合体正向调控TGF-β1诱导的N-cadheim的表达
        (五) 在NSCLC组织里,CDH2的表达与SMAD3和SMAD4的表达呈正相关
    四 讨论
    五 参考文献
全文总结
综述 TGF-β信号通路介导的细胞上皮-间充质转化的研究进展
    参考文献
攻读博士学位期间发表论文
附录：缩略词表及注释
致谢



本文编号：3756280