苯并（a）芘对Twist基因启动子区驱动的报告基因表达影响

发布时间：2023-03-05 14:20

　　目的通过构建Twist基因启动子区荧光素酶报告基因表达质粒,将构建成功的质粒瞬时转染非小细胞肺癌细胞株A549和人胚肾细胞株HEK293,用不同浓度的苯并(a)芘处理后,检测荧光素酶活性,探讨苯并(a)芘诱导Twist基因启动子区驱动的报告基因表达影响,为苯并(a)芘暴露诱导Twist基因表达促进肺癌转移的分子机制理解提供实验依据。方法1.利用分子克隆技术根据NCBI(https://www.ncbi.nim.nih.gov/)网站最新公布的Twist(human)基因启动子区序列,设计带有KpnI和XhoI酶切位点的引物,通过PCR技术扩增长度为451 bp的启动子区序列,与KpnI和XhoI两种核酸限制性内切酶处理的荧光素酶报告基因载体pGL3-basic连接,构建重组质粒,命名为pGL3-TWIST-promoter-luc。通过菌液PCR和重组质粒双酶切及测序鉴定pGL3-TWIST-promoter-luc重组质粒是否构建成功。2.利用瞬时转染技术,将构建成功的pGL3-TWIST-promoter-luc重组质粒和内参质粒分别瞬时转染至非小细胞肺癌细胞株A549和人胚肾细胞...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 引言
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验用主要试剂配制方法
        2.1.4 主要仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 Twist基因启动子荧光素酶报告基因载体构建
        2.2.2 重组质粒的鉴定
        2.2.3 重组质粒的转染
        2.2.4 荧光素酶活性报告基因实验法检测苯并(a)芘对Twist基因启动子的影响
        2.2.5 统计学方法
3 结果
    3.1 Twist基因启动子PCR扩增结果
    3.2 PCR产物与pGL3-basic酶切结果
    3.3 重组载体的筛选及菌液PCR鉴定
    3.4 重组载体的双酶切鉴定结果
    3.5 Twist基因启动子测序结果
    3.6 荧光素酶活性测定
4 讨论
5 结论
参考文献
综述 Twist基因与肺癌关系研究进展
    参考文献
个人简历
致谢



本文编号：3756353