P2X7介导的巨噬细胞调控在肿瘤微环境中的功能和机制研究

发布时间：2023-03-07 15:12

　　肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)是一类肿瘤组织中浸润最为丰富的免疫细胞,其主要由血液中的单核细胞分化而来,呈现高度的异质性和可塑性。TAMs受肿瘤微环境中多种细胞因子、生长因子的调控,在实体瘤或者相邻组织中主要极化为M2型巨噬细胞,参与肿瘤细胞的生长、血管生成、免疫逃逸等,进而促进肿瘤的发生、发展和转移。越来越多的临床观察表明,大量的TAMs浸润与肺癌患者的低生存率或者不良预后密切相关,这些都涉及到TAMs在维持肿瘤微环境中的重要作用。近几年的研究发现,肿瘤微环境中大量存在的ATP会通过相应的嘌呤受体参与到微环境的免疫调控,其中P2X7受体的功能最为关键和重要,其在炎症级联反应、维持肿瘤细胞存活和增殖中发挥着重要作用。然而,P2X7受体对于肿瘤微环境中TAMs的调控作用和机制目前并不清楚。为此,我们通过Q-PCR、Western blot和流式细胞术检测P2X7受体在巨噬细胞上的表达情况,结果显示其在TAMs和IL-4诱导的M2型巨噬细胞上呈现表达上调,提示其对TAMs的重要调控作用。已有文献报道,巨噬细胞的功能性极化和吞噬对于肿瘤...

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 研究背景及文献综述
    1.1 肿瘤微环境与免疫治疗
    1.2 肿瘤微环境中的慢性炎症和巨噬细胞
    1.3 肺癌微环境的生物学机理及其治疗策略
    1.4 肿瘤微环境中的嘌呤及其受体
    1.5 P2X7受体在肿瘤中的研究现状与展望
第二章 实验材料与方法
    一 实验材料
        1.1 实验细胞和动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验耗材和仪器
    二 实验方法
        2.1 细胞、组织的RNA提取和反转
        2.2 常规PCR和实时荧光定量PCR
        2.3 L929上清的制备、骨髓来源巨噬细胞的提取和极化
        2.4 基因敲除小鼠鉴定
        2.5 肿瘤小鼠模型的建立
        2.6 小鼠活体成像IVIS
        2.7 肿瘤组织消化和流式细胞分析
        2.8 组织苏木精-伊红(HE)染色
        2.9 组织切片免疫组织化学染色和免疫荧光染色
        2.10 酶联免疫吸附测定ELISA(双抗夹心法)
        2.11 蛋白提取和Western blot实验步骤
        2.12 活细胞染料染色方法
        2.13 Mojosort CD4/CD8T细胞提取和激活
        2.14 巨噬细胞与T细胞共培养以及功能检测
第三章 实验结果与讨论
    第一节 P2X7受体在肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中呈现高表达
        1.引言
        2.实验结果
        3.小结
    第二节 P2X7受体对巨噬细胞极化和吞噬功能的调控
        1.引言
        2.实验结果
        3.小结
    第三节 P2X7受体缺失通过调控TAMs抑制小鼠肺癌的发生发展
        1.引言
        2.实验结果
        3.小结
    第四节 P2X7受体缺失的TAMs抑制肿瘤生长的机制
        1.引言
        2.实验结果
        3.小结
    第五节 P2X7受体调控巨噬细胞极化的分子机制
        1.引言
        2.实验结果
        3.小结
    第六节 联合P2X7受体抑制剂和临床化疗药物协同抑制肿瘤的生长
        1.引言
        2.实验结果
        3.小结
第四章 全文总结与展望
参考文献
附录1 缩略词
附录2 本文中所有PCR引物序列列表
附录3 博士期间相关科研项目、学术成果以及学术会议
后记



本文编号：3757556