肥胖相关miR-27a上调促肝癌转移及其作用机制的研究

发布时间：2023-03-18 19:06

　　肥胖是已知的易发生肝癌的危险因素之一。然而,肥胖促肝癌转移的能力和机制尚不十分明确。因此,我们在体外诱导前脂肪细胞3T3-L1分化为脂肪细胞及用肥胖小鼠在体内建立肝癌转移模型来模拟肥胖状态下的肿瘤微环境。以此为工具,本文探索了肥胖相关mi R-27a上调促肝癌转移的机制。结果显示:mi R-27a在脂肪细胞及肥胖小鼠模型中均上调,且上调的mi R-27a促进HCC细胞系的迁移和侵袭,并增加肥胖小鼠肺转移结节的数目。在对照组的HCC细胞系及小鼠组织中SFRP1过表达明显减轻了由于mi R-27a的上调导致的β-catenin和MMP7的上调。同时,在肥胖小鼠模型中,EMT相关标志物E-cadherin表达减少、Vimentin表达增多,并与β-catenin上调有关。此外,对临床肝癌标本的探究发现mi R-27a与SFRP1表达呈负相关。综上,我们的结果表明mi R-27a是一个重要的促肝癌转移因子,肥胖相关的mi R-27a上调能通过抑制SFRP1的方式激活wnt/β-catenin通路促进肝癌转移。

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
提要
中文摘要
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第一章 综述
    1.1 肥胖与肝癌的相关进展
        1.1.1 肥胖
        1.1.2 肥胖相关肝癌的流行病学
        1.1.3 肥胖引起肝癌的可能发病机制
    1.2 microRNA在肝癌中的作用
        1.2.1 概述
        1.2.2 microRNA的特性
        1.2.3 microRNA的产生过程
        1.2.4 microRNA在HCC中的生物功能
        1.2.5 microRNA在肿瘤微环境中的作用
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料与器材
        2.1.1 细胞和细胞株
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 临床组织样本
        2.1.4 主要实验材料
        2.1.5 主要实验器材
        2.1.6 引物序列
        2.1.7 主要溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 3T3-L1细胞分化
        2.2.3 质粒转染
        2.2.4 细胞迁移及侵袭实验
        2.2.5 动物饲养及实验模型的建立
        2.2.6 HE染色及免疫组化
        2.2.7 RNA水平检测
        2.2.8 蛋白水平检测
    2.3 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 3T3-L1细胞分泌miR-27a对HepG2细胞转移能力的影响
        3.1.1 HepG2细胞与3T3-L1脂肪细胞共培养体系的建立
        3.1.2 3T3-L1细胞分泌miR-27a对HepG2细胞迁移能力的影响
        3.1.3 3T3-L1细胞分泌miR-27a对HepG2细胞侵袭能力的影响
        3.1.4 小结
    3.2 miR-27a在体外通过抑制SFRP1激活wnt/β-catenin通路
        3.2.1 SFRP1过表达对HepG2细胞转移能力的影响
        3.2.2 SFRP1抑制HepG2细胞转移能力机制的研究
        3.2.3 小结
    3.3 动物模型中脂肪分泌的miR-27a促进肝癌转移
        3.3.1 小鼠肥胖模型的建立及相关miR-27a的表达情况
        3.3.2 肥胖对小鼠肝癌肺转移的影响
        3.3.3 小鼠模型中肥胖促转移机制的探究
        3.3.4 小结
    3.4 临床样本中miR-27a的表达与SFRP1的表达呈负相关
        3.4.1 临床样本中miR-27a与SFRP1的表达情况
        3.4.2 肥胖患者的生存曲线分析
        3.4.3 小结
第四章 讨论
    4.1 肥胖促进肝癌转移与miR-27a高表达相关
    4.2 miR-27a促肝癌转移通过抑制SFRP1与wnt/β-catenin信号通路有关
    4.3 EMT与肝癌转移的关系
    4.4 总结和展望
第五章 结论
第六章 创新点与不足
参考文献
作者简介
攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
致谢



本文编号：3763700