长链非编码RNA MYU在肺腺癌中的功能及机制研究

发布时间：2023-03-19 01:20

　　目的:肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症,患者的5年生存率仅15%-20%,主要分为小细胞和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。其中,肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是NSCLC的一种主要亚型。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的功能性RNA分子的总称,它们不编码蛋白质,但能调控基因表达,进而影响多种肿瘤的发生及发展。lncRNA MYU(c-Myc-upregulated lncRNA)与结肠癌和前列腺癌发生发展有关,但其在NSCLC中的功能及作用机制仍不清楚。本论文旨在研究MYU在LUAD中的功能和可能的作用机制。方法:通过下载肿瘤基因图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中的LUAD临床组织样本数据、采用实时荧光定量聚合酶链式反应,检测收集到的24例LUAD患者的肿瘤组织及20例癌旁非肿瘤组织,以及人LUAD细胞系与正常人支气管上皮细胞系中MYU的表达量,考察MYU的表达与LUAD的临床相关性。采用MTT法、克隆...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 肺癌简介
        1.1.1 肺癌概况
        1.1.2 肺癌的治疗方法
    1.2 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)
        1.2.1 非编码RNA及分类
        1.2.2 lncRNA的分类及特性
        1.2.3 lncRNA分子的功能
    1.3 lncRNA与癌症
    1.4 lncRNA与肺癌
        1.4.1 lncRNA作为非小细胞肺癌的生物标志物
        1.4.2 lncRNA调控非小细胞肺癌的生物学行为
    1.5 lncRNA MYU
    1.6 本课题的研究内容及意义
第二章 MYU在肺腺癌中的表达及相关性研究
    2.1 实验仪器、材料与试剂
        2.1.1 样本收集
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 材料与试剂
    2.2 方法
        2.2.1 生物信息学分析
        2.2.2 qRT-PCR检测MYU在肺腺癌组织中的表达量
        2.2.3分子生物学实验
        2.2.4 细胞复苏、培养
        2.2.5 细胞传代
    2.3 实验结果
        2.3.1 MYU在肺腺癌临床组织样本统计数据中高表达
        2.3.2 MYU在肺腺癌组织及细胞中含量异常增高
        2.3.3 组织样本情况
    2.4 讨论与小结
第三章 敲减MYU对肺腺癌细胞增殖、迁移及周期凋亡的影响
    3.1 实验仪器、材料与试剂
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 材料与试剂
    3.2 方法
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 细胞复苏、传代
        3.2.3 siRNA序列设计与合成
        3.2.4 细胞转染及qRT-PCR实验
        3.2.5 MTT实验
        3.2.6 克隆形成实验
        3.2.7 BrdU实验
        3.2.8 细胞划痕实验
        3.2.9 细胞周期实验
        3.2.10 细胞凋亡实验
        3.2.11 Western blot实验
        3.2.12 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 敲减MYU可抑制肺腺癌细胞增殖能力
        3.3.2 敲减MYU可抑制肺腺癌细胞迁移
        3.3.3 敲减MYU可引起细胞周期阻滞并促进细胞凋亡
        3.3.4 敲减MYU通过调控c-Myc及其周期相关的下游效应分子的表达诱导LUAD细胞周期阻滞
    3.4 讨论与小结
第四章 MYU过表达对肺腺癌细胞增殖及迁移的影响
    4.1 实验仪器、材料与试剂
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 材料与试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 目的基因的获取
        4.2.2 过表达载体的构建
        4.2.3 MYU过表达对细胞存活率及增殖能力的影响
        4.2.4 统计学分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 MYU在肺腺癌细胞中成功过表达
        4.3.2 MYU过表达促进肺腺癌细胞的增殖能力
        4.3.3 MYU过表达促进肺腺癌细胞的迁移能力
    4.4 讨论与小结
第五章 敲减MYU对小鼠体内肿瘤的影响
    5.1 实验仪器、材料与试剂
        5.1.1 实验仪器
        5.1.2 材料与试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 试剂配制
        5.2.2 小鼠肿瘤模型的建立
        5.2.3 制作石蜡切片
        5.2.4 免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)
        5.2.5 MYU定位
        5.2.6 统计学分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 敲减MYU抑制了PC9 细胞在裸鼠体内的肿瘤生长
        5.3.2 敲减MYU调控c-Myc及其周期相关的下游效应分子CDK6和p27蛋白的表达
        5.3.3 MYU在肺腺癌细胞中主要定位于细胞核
    5.4 讨论与小结
第六章 总结与展望
    6.1 工作总结
    6.2 工作展望
参考文献
致谢
在学期间发表的学术论文及其他科研成果



本文编号：3764252