Caerin多肽体内外抗肿瘤作用与提高治疗性疫苗疗效研究

发布时间：2023-04-02 02:07

　　研究背景:人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持续感染可以引起皮肤粘膜疣样病变,宫颈癌、外阴癌、肛门癌和头颈部肿瘤等多种良性或恶性疾病。宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,发病率占女性肿瘤第二位,约70%宫颈癌患者与HPV 16/18型有关。预防HPV感染的疫苗已于2006年开始应用,但此类疫苗仅适用于从未感染的健康个体,对现症HPV感染及其所致疾病无效。尖锐湿疣(Genital Warts)是由HPV感染引起的以疣状病变为主的常见性传播疾病,是我国第二大性传播疾病,约占所有性传播疾病的16%,大约有40种亚型的HPV可导致尖锐湿疣,90%以上的尖锐湿疣有HPV6/11亚型引起,至今没有一种治疗方法或药物能根除尖锐湿疣。病毒或肿瘤治疗性疫苗通过诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTLs)特异性杀死肿瘤或病毒感染细胞。HPV16 E7长肽免疫时阻断白介素10(IL-10)能够比不阻断白介素10诱导产生更多的特异性CTLs,并浸润到肿瘤组织,但对肿瘤生长抑制作用甚微,提示肿瘤微环境抑制HPV治疗性疫苗的疗效。从两栖动物皮肤分泌物分离...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言
第二章 CAERIN多肽抗肿瘤活性研究
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 合成多肽
        2.2.2 实验动物
        2.2.3 动物实验器械
        2.2.4 细胞来源
        2.2.5 实验试剂
        2.2.6 仪器与设备
    2.3 实验溶液的配制
        2.3.1 遗传霉素溶液
        2.3.2 MTT溶液
        2.3.3 CAERIN多肽溶液
        2.3.4 TC-1细胞完全培养基
        2.3.5 HUVEC细胞完全培养基
        2.3.6 细胞冻存液
    2.4 实验方法
        2.4.1 细胞复苏
        2.4.2 细胞换液
        2.4.3 细胞传代
        2.4.4 细胞冻存
        2.4.5 MTT法检测CAERIN多肽对TC-1和HUVEC增殖的影响
        2.4.6 流式细胞术(FCM)检测TC-1细胞凋亡
        2.4.7 建立TC-1荷瘤小鼠模型
        2.4.8 TC-1肿瘤挑战实验
        2.4.9 统计学分析
    2.5 实验结果
        2.5.1 CAERIN多肽对TC-1 细胞和HUVEC细胞增殖的影响
        2.5.2 CAERIN多肽对TC-1 细胞凋亡的作用
        2.5.3 CAERIN1.1 和1.9 在体内抑制TC-1 的生长
    2.6 讨论
    2.7 小结
第三章 CAERIN多肽温敏性凝胶的制备与研究
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 空白凝胶基质成分
        3.2.2 合成多肽
        3.2.3 实验动物
        3.2.4 细胞来源
        3.2.5 实验试剂
        3.2.6 仪器与设备
    3.3 实验溶液的配制
        3.3.1 戊巴比妥钠溶液
        3.3.2 TC-1肿瘤组织消化液
    3.4 实验方法
        3.4.1 制备CAERIN多肽温敏凝胶
            3.4.1.1 空白凝胶基质制备
            3.4.1.2 CAERIN多肽温敏凝胶制备
        3.4.2 MTT实验检测温敏性凝胶的抑癌作用
        3.4.3 温敏性凝胶的特性
        3.4.4 肿瘤挑战实验
        3.4.5 局部应用 F1/F3 凝胶治疗 TC-1 肿瘤
        3.4.6 使用流式细胞仪分析肿瘤组织内浸润的免疫细胞
        3.4.7 统计分析
    3.5 实验结果
        3.5.1 温敏性原位凝胶的制备及其物理性质
        3.5.2 F1/F3凝胶在体外能够抑制TC-1增殖且性质稳定
        3.5.3 瘤内注射F1/F3凝胶在体内能够抑制TC-1细胞的生长
        3.5.4 局部应用F1/F3凝胶在体内可抑制TC-1肿瘤的生长
        3.5.5 局部应用F1/F3 凝胶招募更多T细胞和NK细胞至TC-1 肿瘤组织
    3.6 讨论
    3.7 小结
第四章 CAERIN多肽提高治疗性疫苗EX/MPLA/ΑNTI-IL10R抗肿瘤研究
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 治疗性疫苗成分
        4.2.2 合成多肽
        4.2.3 实验动物
        4.2.4 细胞来源
        4.2.5 实验试剂
        4.2.6 仪器与设备
    4.3 实验溶液的配制
        4.3.1 HPV治疗性疫苗
        4.3.2 CAERIN多肽溶液
    4.4 实验方法
        4.4.1 CAERIN多肽联合治疗性疫苗免疫对TC-1 荷瘤小鼠生存周期的影响
        4.4.2 统计分析
    4.5 实验结果
    4.6 讨论
    4.7 小结
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录1 CAERIN多肽质量分析报告
附录2 动物实验伦理审查表
附录3 中英文缩略词表
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3778314