miR-152和DNMTs家族在胃癌发生发展中的作用及机制
发布时间：2023-04-02 04:31
目的:研究miR-152和DNMTs家族成员在胃癌中的作用以及交联对话的机制,为临床评估胃癌的预后及寻找治疗靶点提供实验依据。方法:首先用原位杂交的方法检测miR-152在80对胃癌组织及其相应的癌旁正常组织中的表达情况,并采用qRT-PCR检测胃癌组织及不同分化程度的胃癌细胞株的miR-152的表达水平。接着通过体外转染miR-152 mimic至胃癌上皮细胞株MKN-45和HGC-27,观察miR-152表达变化对细胞增殖能力、侵袭能力以及细胞非锚定依赖性生长能力的影响。通过免疫组化和qRT-PCR的方法检测DNMTs在胃癌组织和细胞中的表达,以及DNMT1蛋白表达和miR-152表达之间的相关性。通过生物学信息软件、荧光素酶报告基因预测和鉴定miR-152的靶基因。通过共同转染miR-152和3’UTR突变型DNMT1至胃癌上皮细胞株MKN-45和HGC-27,检测细胞中DNMT1蛋白的表达及观察细胞增殖能力、侵袭能力和细胞非锚定依赖性生长能力的变化。结果:原位杂交和qRT-PCR结果显示,相较于癌旁正常组织,有80%(64/80)胃癌患者的胃癌组织中miR-152表达呈低表达状...
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略表
前言
第一章 前期工作基础
第二章 miR-152在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达
1 实验材料
1.1 组织标本
1.2 细胞株
1.3 主要实验设备
1.4 主要试剂
1.5 主要试剂配制
2 实验方法
2.1 原位杂交检测
2.2 细胞培养
2.3 qRT-PCR检测miR-152的表达
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 原位杂交方法检测胃癌组织中miR-152的表达
3.2 qRT-PCR的方法检测胃癌组织中miR-152的表达
3.3 miR-152在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达
4 结论
第三章 miR-152对人类胃癌细胞株生物行为的影响
1 实验材料
1.1 细胞株
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要试剂配制
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.2 细胞转染
2.3 细胞中小RNA的提取和质量判断
2.4 qRT-PCR检测分析miR-152
2.5 细胞增殖能力的检测（MTT比色法）
2.6 软琼脂集落形成实验
2.7 Transwell侵袭实验
2.8 统计学处理
3 结果
3.1 转染效率检测
3.2 miR-152高表达对胃癌细胞增殖力的抑制
3.3 miR-152高表达对胃癌细胞侵袭力的抑制
3.4 miR-152 mimic的有效作用时间检测
3.5 miR-152高表达对细胞非锚定依赖性生长能力的影响
4 结论
第四章 DNMTs家族在胃癌中的表达
1 实验材料
1.1 组织标本
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 免疫组化检测DNMTs在胃癌组织中的表达
2.2 细胞培养
2.3 qRT-PCR检测DNMTs mRNA
2.4 Werstern Blot检测DNMTs蛋白表达
2.5 统计学处理
3 结果
3.1 DNMTs在胃癌组织中的表达
3.2 DNMTs在胃癌细胞中的表达
3.3 胃癌组织中DNMT1表达与miR-152表达相关性分析
3.4 胃癌细胞株DNMT1表达与miR-152表达相关性分析
4 结论
第五章 miR-152和DNMT1的靶向关系分析
1 实验材料
1.1 细胞株
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要配制试剂
2 实验方法
2.1 脂质体细胞转染
2.2 实时荧光定量PCR检测转染细胞的miR-152表达水平
2.3 qRT-PCR检测DNMT1 mRNA
2.4 荧光素酶报告基因载体的构建
2.5 双荧光素酶报告基因分析
2.6 Western Blot蛋白印迹
2.7 统计学处理
3 结果
3.1 miR-152靶基因的预测
3.2 荧光素酶报告基因分析
4 结论
第六章 DNMT1逆转miR-152对胃癌细胞生物行为的影响
1 实验材料
1.1 细胞株
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 质粒构建
2.2 细胞的慢病毒感染
2.3 脂质体细胞转染
2.4 转染效率的PCR检测
2.5 细胞中总RNA的提取
2.6 qRT-PCR定量分析miR-152
2.7 qRT-PCR检测DNMT1 mRNA
2.8 Western Blot蛋白印迹qRT-PCR
2.9 细胞增殖能力的检测
2.10 软琼脂集落形成实验
2.11 Transwell侵袭实验
2.12 统计学处理
3 实验结果
3.1 转染效率的检测
3.2 DNMT1 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞增殖能力的影响
3.3 DNMTl 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞侵袭能力的影响
3.4 DNMTl 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞非锚定依赖性生长能力
4 结论
总结
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3778539
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略表
前言
第一章 前期工作基础
第二章 miR-152在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达
1 实验材料
1.1 组织标本
1.2 细胞株
1.3 主要实验设备
1.4 主要试剂
1.5 主要试剂配制
2 实验方法
2.1 原位杂交检测
2.2 细胞培养
2.3 qRT-PCR检测miR-152的表达
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 原位杂交方法检测胃癌组织中miR-152的表达
3.2 qRT-PCR的方法检测胃癌组织中miR-152的表达
3.3 miR-152在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达
4 结论
第三章 miR-152对人类胃癌细胞株生物行为的影响
1 实验材料
1.1 细胞株
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要试剂配制
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.2 细胞转染
2.3 细胞中小RNA的提取和质量判断
2.4 qRT-PCR检测分析miR-152
2.5 细胞增殖能力的检测（MTT比色法）
2.6 软琼脂集落形成实验
2.7 Transwell侵袭实验
2.8 统计学处理
3 结果
3.1 转染效率检测
3.2 miR-152高表达对胃癌细胞增殖力的抑制
3.3 miR-152高表达对胃癌细胞侵袭力的抑制
3.4 miR-152 mimic的有效作用时间检测
3.5 miR-152高表达对细胞非锚定依赖性生长能力的影响
4 结论
第四章 DNMTs家族在胃癌中的表达
1 实验材料
1.1 组织标本
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 免疫组化检测DNMTs在胃癌组织中的表达
2.2 细胞培养
2.3 qRT-PCR检测DNMTs mRNA
2.4 Werstern Blot检测DNMTs蛋白表达
2.5 统计学处理
3 结果
3.1 DNMTs在胃癌组织中的表达
3.2 DNMTs在胃癌细胞中的表达
3.3 胃癌组织中DNMT1表达与miR-152表达相关性分析
3.4 胃癌细胞株DNMT1表达与miR-152表达相关性分析
4 结论
第五章 miR-152和DNMT1的靶向关系分析
1 实验材料
1.1 细胞株
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要配制试剂
2 实验方法
2.1 脂质体细胞转染
2.2 实时荧光定量PCR检测转染细胞的miR-152表达水平
2.3 qRT-PCR检测DNMT1 mRNA
2.4 荧光素酶报告基因载体的构建
2.5 双荧光素酶报告基因分析
2.6 Western Blot蛋白印迹
2.7 统计学处理
3 结果
3.1 miR-152靶基因的预测
3.2 荧光素酶报告基因分析
4 结论
第六章 DNMT1逆转miR-152对胃癌细胞生物行为的影响
1 实验材料
1.1 细胞株
1.2 主要实验设备
1.3 主要试剂
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 质粒构建
2.2 细胞的慢病毒感染
2.3 脂质体细胞转染
2.4 转染效率的PCR检测
2.5 细胞中总RNA的提取
2.6 qRT-PCR定量分析miR-152
2.7 qRT-PCR检测DNMT1 mRNA
2.8 Western Blot蛋白印迹qRT-PCR
2.9 细胞增殖能力的检测
2.10 软琼脂集落形成实验
2.11 Transwell侵袭实验
2.12 统计学处理
3 实验结果
3.1 转染效率的检测
3.2 DNMT1 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞增殖能力的影响
3.3 DNMTl 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞侵袭能力的影响
3.4 DNMTl 3'UTR的突变逆转miR-152高表达对细胞非锚定依赖性生长能力
4 结论
总结
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3778539
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3778539.html
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