转运RNA衍生片段tRF-3019a在胃癌中的表达、临床意义及功能与机制研究

发布时间：2023-04-05 06:20

　　目的:胃癌(Gastric cancer,GC)是全球范围内严重威胁人类健康的癌症之一,占全球癌症发生率的第三位,癌症相关死亡原因中位居第二位。尽管外科手术治疗和其它辅助治疗手段不断提高,胃癌的预后仍不满意。因此,探寻胃癌发生发展中复杂的分子机制,发现高效的胃癌早期诊断、预后评价的分子标志物和寻找靶向治疗的位点具有重要的临床意义。在生物体内转运RNA(transfer RNA,tRNA)是细胞蛋白质合成机器的一个重要元件,携带氨基酸进入核糖体内进行蛋白质的翻译。尽管已经进行了几十年深入细致的研究,但对于其功能的认识尚未完全明确,特别是其衍生的小分子RNA片段(tRNA-derived fragment,tRF)作为一种潜在的基因表达调控分子引起了研究者们的兴趣和关注,其功能正逐渐被人们所认识。越来越多的证据显示,来源于tRNA的小分子片段具有重要的生物学作用并引起国内外研究者的极大关注。但目前在胃癌中的生物学功能及机制仍不清楚。因此,我们探讨其在胃癌发生发展中的复杂的分子机制,为胃癌的治疗提供新思路和靶标。研究方法:第一部分,我们通过芯片数据分析差异表达的tRNA衍生片段,根据芯片结果...

【文章页数】：142 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 转运RNA衍生片段tRF-3019a在胃癌中表达与临床意义
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 临床标本采集
            2.1.3 临床病理特征及随访信息收集
            2.1.4 MINTbase数据库
            2.1.5 主要试剂
            2.1.6 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞复苏
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 细胞传代
            2.2.4 细胞冻存
            2.2.5 RNA提取
            2.2.6 RNA的浓度和纯度检测
            2.2.7 反转录
            2.2.8 加尾反转录
            2.2.9 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)
            2.2.10 琼脂糖凝胶电泳
            2.2.11 临床病理特征及预后随访信息的评估
            2.2.12 芯片分析
            2.2.13 数据分析
    3 结果
        3.1 tRFs&ti RNAs芯片结果分析
        3.2 tRF-3019a基本信息
        3.3 tRFs&ti RNAs芯片结果验证
        3.4 tRF-3019a在胃癌组织中的表达
        3.5 tRF-3019a与胃癌病人病理资料的关系
        3.6 tRF-3019a与胃癌病人的预后关系
            3.6.1 tRF-3019a与总体胃癌病人预后的关系
            3.6.2 tRF-3019a在胃癌病人亚组人群中的预后价值分析
            3.6.3 影响胃癌病人生存的风险因素分析
        3.7 tRF-3019a在胃癌中的诊断价值
    4 讨论
    5 结论
第二部分 转运RNA衍生片段3019a在胃癌中的功能与机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞复苏
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 细胞传代
            2.2.4 细胞冻存
            2.2.5 RNA提取
            2.2.6 RNA的浓度和纯度检测
            2.2.7 普通反转录
            2.2.8 加尾反转录
            2.2.9 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)
            2.2.10 细胞转染
            2.2.11 细胞增殖实验(CCK-8实验)
            2.2.12 细胞周期检测实验
            2.2.13 细胞凋亡检测实验
            2.2.14 Transwell细胞迁移和侵袭实验
            2.2.15 划痕实验
            2.2.16 蛋白提取
            2.2.17 BCA法蛋白浓度测定
            2.2.18 Western blot实验
            2.2.19 双荧光素酶实验
            2.2.20 RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验
    3 结果
        3.1 tRF-3019a模拟物和抑制剂转染效率
        3.2 过表达tRF-3019a促进胃癌细胞增殖
        3.3 抑制tRF-3019a减少胃癌细胞增殖
        3.4 抑制tRF-3019a对胃癌细胞周期的影响
        3.5 抑制tRF-3019a对胃癌细胞凋亡的影响
        3.6 过表达tRF-3019a促进胃癌细胞迁移和侵袭
        3.7 抑制tRF-3019a减少胃癌细胞迁移和侵袭
        3.8 过表达tRF-3019a促进胃癌细胞迁移运动能力
        3.9 抑制tRF-3019a减弱胃癌细胞迁移运动能力
        3.10 生物信息学预测tRF-3019a的靶基因
        3.11 验证tRF-3019a的靶基因FBXO47
        3.12 荧光素酶实验验证直接作用关系
        3.13 RNA结合蛋白免疫沉淀实验
        3.14 FBXO47敲除效率
        3.15 沉默FBXO47促进胃癌细胞增殖
        3.16 沉默FBXO47促进胃癌细胞迁移和侵袭
        3.17 沉默FBXO47促进胃癌细胞迁移运动
        3.18 tRF-3019a通过FBXO47抑制胃癌的增殖、迁移和侵袭
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
在学期间科研业绩
致谢
个人简历



本文编号：3782902