HMGA1通过ILK/Akt/GSK-3β信号通路促进了肝癌细胞的增殖和侵袭

发布时间：2023-04-09 23:02

　　第一部分:HMGA1 sh RNA干扰序列的筛选目的:本部分为探讨HMGA1和ILK信号通路在肝癌中的联系,首先设计合成了3个针对HMGA1基因的sh RNA干扰序列和1个阴性对照序列。通过实时定量PCR检测,筛选出了干扰效率最高的sh RNA序列。然后将该序列构建成慢病毒表达载体,以达到高效稳定的HMGA1低表达状态,从而为后续的实验打下良好的基础。方法:HMGA1 3个sh RNA质粒和1个阴性对照质粒分别瞬时转染细胞。转染后48h收获细胞,进行Realtime-PCR检测HMGA1 m RNA表达水平。上述筛选得到的最佳干扰序列构建成慢病毒干扰载体,感染细胞并于72 h收获细胞,进行Western blot检测HMGA1蛋白表达。并用荧光显微镜观察病毒感染效率。结果:1 HMGA1 sh RNA干扰序列的筛选Realtime PCR结果显示:sh NC对HMGA1的m RNA表达无明显抑制作用(P>0.05),而3个HMGA1 sh RNA干扰序列均能显著抑制MHCC97H细胞中HMGA1 m RNA的表达水平(P<0.05),其中HMGA1-sh RNA-2对HMG...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
中英文缩略词表
前言
第一部分：HMGA1 shRNA干扰序列的筛选
    1 材料与方法
        1.1 细胞株
        1.2 HMGA1 shRNA
        1.3 主要仪器与设备
        1.4 主要试剂
        1.5 自配试剂
        1.6 实验方法
    2 结果
        2.1 HMGA1 shRNA干扰序列的筛选
        2.2 慢病毒LV-HMGA1-shRNA转染效率检测
        2.3 LV-HMGA1-shRNA对MHCC97H细胞HMGA1蛋白表达水平的抑制作用
    3.讨论
第二部分：HMGA1调控了ILK/Akt/GSK-3β信号通路
    1 材料与方法
        1.1 细胞株
        1.2 质粒
        1.3 主要仪器与设备
        1.4 主要试剂
        1.5 自配试剂
        1.6 实验方法
    2 结果
        2.1 HMGA1和ILK mRNA和蛋白表达水平的变化
        2.2 Western blot检测各处理组细胞p-Akt和p-GSK-3β的表达水平
    3.讨论
第三部分：HMGA1通过调控ILK/Akt/GSK-3β信号通路促进了肝癌细胞的增殖和存活
    1 材料与方法
        1.1 细胞株
        1.2 主要仪器与设备
        1.3 主要试剂
        1.4 自配试剂
        1.5 实验方法
    2 结果
        2.1 各组细胞增殖活力的变化
        2.2 各组细胞凋亡水平的变化
    3 讨论
第四部分：HMGA1通过调控ILK/Akt/GSK-3β信号通路促进了肝癌细胞的侵袭和迁移
    1 材料与方法
        1.1 细胞株
        1.2 主要仪器与设备
        1.3 主要试剂
        1.4 自配试剂
        1.5 实验方法
    2 结果
        2.1 各组细胞侵袭能力的变化
        2.2 各组细胞迁移能力的变化
    3.讨论
第五部分： cyclinD1、c-Myc、MMP2、MMP9可能是HMGA1/ILK/Akt/GSK-3β信号通路的下游效应器
    1 材料与方法
        1.1 细胞株
        1.2 主要仪器与设备
        1.3 主要试剂
        1.4 自配试剂
        1.5 实验方法
    2 结果
        2.1 各组MMP2、MMP9、cyclinD1和c-Myc mRNA表达水平的变化
        2.2 各组MMP2、MMP9、cyclinD1和c-Myc蛋白表达水平的变化
    3.讨论
全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3787889